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山葡萄浆果含有前花色苷、蛋白质及矿物质等营养元素,是具有很高经济价值的果树资源。本试验以山葡萄果皮为材料,成功构建了转色前果皮cDNA文库;并利用RACE方法克隆了CHS和CHI基因cDNA全长序列,进行了生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对山葡萄果皮成熟的7个时期的基因表达进行了分析。主要研究结果如下:以山葡萄转色前果皮为试验材料,采用In-Fusion(?) SMARTer(?) Directional cDNA Library Construction技术构建了cDNA文库,经鉴定,文库初始滴度及扩增后滴度分别为1.15 ×106pfu.mL-1和2.86×109 pfu.mL-1,插入片段长度约为0.5-2.0 kb,平均0.9 kb,重组率高达100%。这些结果说明,本试验在山葡萄转色前果皮中成功构建了cDNA文库。为今后山葡萄功能基因分离克隆和功能基因组学研究建立了基础。通过RT-PCR结合快速扩增cDNA末端(RACE)方法,获得到了CHS和CHI基因的全长cDNA序列。生物信息学分析结果显示,这两个基因都具有完整的开放阅读框,其中,CHS基因的cDNA全长1461 bp,含有一个1182bp的开放阅读框(ORF),编码393个氨基酸残基的蛋白质;CHI基因的cDNA全长955 bp,含有一个705 bp的ORF,编码234个氨基酸残基的蛋白质。共有的特性是:均为稳定蛋白质、整个多肽链表现为亲水性、不含跨膜结构域、编码的蛋白不具有信号肽、分子发育树分析表明,均与欧亚种葡萄同源性最高。以山葡萄成熟过程中的7个时期浆果果皮为试验材料,ACTIN为内参基因,采用实时荧光定量PCR技术,分析了CHS和CHI基因的表达模式。结果显示,在7个时期中均有表达,除了转色前和10%转色时期二者的表达量相近之外,其它5个时期中,CHS基因的表达量均明显高于CHI基因。且CHS基因在七个时期中表达具有明显的规律性,从转色前至100%成熟期表达量呈依次增加的趋势,完熟期表达量下降。而CHI基因的表达量没有明显的规律性,转色前最低,完熟期最高。