论文部分内容阅读
果胶甲基酯酶(pectin methylesterase,PME)是一种普遍存在于植物细胞中的果胶酶,主要起内源调控植物细胞壁上以及细胞之间果胶含量的作用。为了研究在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中油菜素内酯(Brassinolide BR)和一氧化氮(Nitric oxide NO)对PME基因的表达调控,我们进行了一系列实验,获得以下结论:1.BR和NO对PME基因的表达调控:研究表明,BR可以促进PME基因的表达,NO可以抑制PME基因的表达,并且NO能够抑制BR对PME基因的调控作用,但BR不能影响NO对PME基因的表达调控。这就说明,PME基因是BR和NO共同作用的位点,BR和NO可以共同调控该基因的表达,NO对PME基因的作用位点在BR对该基因作用位点的上游。由此可见,BR和NO的一些生理功能的调节可能是通过PME基因实现的。2.检测胁迫条件对拟南芥PME基因的影响:实验证明,盐胁迫,渗透胁迫,冷胁迫能够促进PME基因的表达,热胁迫能够抑制该基因的表达,并且这些胁迫对PME的调节是通过BR来完成的,BR能够响应盐胁迫、渗透胁迫、温度胁迫等植物的逆境胁迫,PME可能是BR响应这些胁迫的一个重要的作用位点。3.利用Gateway技术对拟南芥PME基因启动子和编码区的克隆以及植物表达载体的构建:根据已报道的拟南芥PME基因序列,通过PCR技术从拟南芥中扩增得到PME基因的启动子片段及CDS全长,利用Gateway克隆技术,将启动子构建到启动子分析载体pMDC163∶∶CUS上,获得植物表达载体pMDC-PME∶∶CUS,将CDS区构建到细胞定位分析载体pMDC43-GFP上,获得植物表达载体pMDC-PME-GFP,将其分别转入农杆菌GV3101中,通过花序浸染法转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株,为深入研究PME基因在拟南芥组织水平以及细胞水平上的定位奠定基础。