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目的:研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙已基)酯(Di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)作用于孕鼠后,通过分析胎鼠基因组DNA甲基化水平和胰岛素样因子3(INSL3)基因CpG岛甲基化状态,并检测INSL3和三种DNA甲基化转移酶的表达,探讨DNA甲基化在DEHP诱发小鼠隐睾过程中的作用,以期初步揭示DEHP导致隐睾发生的表观遗传调控机制。方法:妊娠昆明小鼠(KM mice)随机分为3组,每组20只:正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠12.5d到妊娠18.5d分别持续经口予以玉米油和DEHP[500 mg/(kg·d)],正常对照组不予灌药。高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC )和甲基化敏感扩增多态性技术(Methylation-sensitive amplification polymorphism technique,MSAP)检测基因组DNA整体甲基化水平;重亚硫酸盐修饰后甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)技术分析INSL3基因CpG岛甲基化状态;同时实时荧光定量PCR检测INSL3和三种DNA甲基化转移酶的表达。结果:DEHP实验组基因组DNA甲基化程度明显增高,其甲基化水平为34.03%±3.05%;而正常对照组和玉米油对照组小鼠睾丸组织基因组DNA甲基化程度分别为28.37%±2.37%和28.58%±2.45%。DEHP实验组INSL3基因第一外显子区CpG岛存在异常甲基化,其mRNA和蛋白质的表达量分别为对照组的1/3和1/4。三种甲基化转移酶的表达在DEHP实验组均有不同程度的增高,与对照组相比其差异具有显著性(Dnmt1,P<0.05;Dnmt3a,P<0.01;Dnmt3b,P<0.05)。结论:环境内分泌干扰物DEHP通过影响三种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高和INSL3基因CpG异常甲基化,从而抑制睾丸下降过程中包括关键因子(INSL3)的表达,导致隐睾的发生。DNA甲基化等表观遗传调控在隐睾的发生、发展中具有重要的作用,表观遗传修饰异常可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。