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本文通过合成具有五氯硝基苯分子结构特征的半抗原，采用活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）或卵清蛋白（OVA）进行偶联，分别制备了免疫原和包被抗原。免疫原免疫新西兰大耳白兔，获得五氯硝基苯的抗血清，ELISA法测的其效价为1∶1.2×106，用多克隆抗体建立了五氯硝基苯的间接ELISA法。间接ELISA法五氯硝基苯的抑制中浓度IC50为76.7 ng／mL，五氯硝基苯的检测限(IC10)为4.7ng／mL。多克隆抗体与其结构类似物的交叉反应为五氯酚：3.23％，六氯苯：12.22％，2，4-D：＜2％，标准曲线的线形范围为10-2000 ng／mL。研究了间接ELISA法的影响因素（pH值、离子强度、有机溶剂）：pH值为中性的情况对ELISA的影响很小，5％的乙腈对ELISA基本上没有影响。初步建立了水样（井水、河水）和土壤样品中五氯硝基苯间接ELISA法的提取方法，回收率分别是86.7％、81.3％和78.9％。对实际样品进行了检测，并与气相色谱进行比较，二者检测结果无显著性差异。如果进一步研究开发试剂盒，可适用于现场大量样品的快速检测。