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目的:了解雌、孕激素对人子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)JEC细胞体外增殖及细胞周期分布的作用,并探讨雌、孕激素对JEC细胞中p57kip2、Cyclin E表达的影响,为进一步研究EC的发生、发展提供理论依据。方法:选取中级别的人子宫内膜癌JEC细胞进行体外培养,(1)采用雌二醇(β-estradiol,E2)干预,分别设置高、中、低三种浓度(10-6、10-8、10-10 mol/L)作为实验组,采用只加培养液的JEC细胞作为对照组;(2)采用孕酮(progesterone,P)干预,分别设置高、中、低三种浓度(10-4、10-6、10-8 mol/L)作为实验组,采用只加培养液的JEC细胞作为对照组,分别培养24、48、72、96 h后,用MTT检测JEC细胞的增殖状况;分别培养24、48、72 h后,用倒置显微镜和透射电镜观察JEC细胞的形态结构改变,蛋白印迹法(western blot,WB)检测JEC细胞中p57kip2、Cyclin E蛋白的表达;分别培养72 h后,用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测JEC细胞的细胞周期分布变化;分别培养24、72 h后,用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测JEC细胞中p57kip2、Cyclin E mRNA的表达。结果:MTT结果显示:(1)中、低浓度的E2可以促进JEC细胞的增殖(P<0.05),高浓度则抑制JEC细胞的增殖(P>0.05)。(2)中、低浓度的P可以促进JEC细胞的增殖(P<0.05),高浓度则抑制JEC细胞的增殖(P<0.05)。光镜结果显示:(1)JEC细胞形态大多呈长椭圆形,胞核居中,核仁明显。E2中、低浓度组细胞的分布密度均比对照组增高,高浓度组细胞的分布密度比对照组降低,各组细胞形态均无明显变化。(2)P中、低浓度组细胞的分布密度均比对照组增高,高浓度组细胞的分布密度比对照组降低,各组细胞形态均无明显变化。电镜结果显示:(1)随着E2作用浓度的增高,JEC细胞的微绒毛、分泌泡减少。(2)随着p作用浓度的增高,jec细胞中微绒毛、分泌泡数量增多。fcm结果显示:(1)e2作用jec细胞72h后,在g0/g1期的分布相对减少,在s期的分布显著增多(p<0.05)。(2)p作用jec细胞72h后,在g0/g1期的分布略微增加(p>0.05)。wb结果显示:(1)e2作用于jec细胞,同一时间不同浓度比较,24h,p57kip2蛋白在中浓度组表达最低,高浓度组表达最高(p<0.05),cycline蛋白在中浓度组表达最高,高浓度组表达最低(p<0.05),48、72h,随着浓度的升高,p57kip2、cycline蛋白的表达均逐渐增加(p<0.05)。同一浓度不同时间比较,低浓度组p57kip2蛋白在48h表达最低,72h表达最高(p<0.05),高、中浓度组随着时间的推移,p57kip2蛋白的表达逐渐增加(p<0.05);在中、低浓度组随着时间的延长,cycline蛋白表达逐渐降低(p<0.05),高浓度组cycline蛋白在24h表达最低,在48h表达最高(p>0.05)。e2作用jec细胞后,p57kip2、cycline蛋白表达无相关性(p>0.05)。(2)p作用于jec细胞,同一时间不同浓度比较,24h,p57kip2蛋白的表达在中浓度组最低,高浓度组最高(p<0.05),cycline蛋白的表达在中浓度组最低,低浓度组最高(p<0.05);48、72h,随着浓度的升高,p57kip2蛋白的表达逐渐增加(p>0.05),而cycline蛋白的表达逐渐降低(p<0.05)。同一浓度不同时间比较,随着时间的延长,三组p57kip2蛋白的表达均呈递增趋势(p<0.05);低浓度组cycline蛋白的表达在24h最高,48h最低(p<0.05),高、中浓度组,随着时间的延长,cycline蛋白的表达均呈递减趋势(p<0.05)。p作用jec细胞后,p57kip2、cycline蛋白表达之间呈负线性相关关系(p<0.05)。rt-qpcr结果显示:(1)e2作用于jec细胞,同一时间不同浓度比较,24、72h,随着e2作用浓度的增高,p57kip2、cyclinemrna的表达均逐渐增高(p<0.05)。同一浓度不同时间比较,三种浓度p57kip2mrna在72h的表达量均比24h的表达量高(p<0.05);高、中浓度组cyclinemrna在72h的表达量均比24h的表达量低(p<0.05),低浓度组cyclinemrna在72h的表达量较24h的表达量增高(p>0.05)。e2作用jec细胞后,p57kip2、cyclinemrna表达无相关性(p>0.05)。(2)p作用于jec细胞,同一时间不同浓度比较,24、72h,随着p作用浓度的升高,p57kip2mrna的表达亦逐渐增高(p<0.05),而cyclinemrna的表达逐渐降低(p<0.05)。同一浓度不同时间比较,三种浓度p57kip2mrna在72h的表达量比24h的表达量均高(P<0.05),而三种浓度Cyclin E mRNA在72 h的表达量比24 h的表达量均低(P<0.05)。P作用JEC细胞后,p57kip2、Cyclin E mRNA表达之间呈负线性相关关系(P<0.05)。结论:p57kip2、Cyclin E mRNA和蛋白在EC发生、发展中的作用均受到雌、孕激素的影响。随着雌、孕激素作用浓度增加、作用时间延长,JEC细胞由增殖促进状态变成增殖抑制状态。高、中浓度组随着雌激素作用时间的延长,p57kip2 mRNA和蛋白的表达均逐渐增高,而Cyclin E mRNA的表达逐渐降低,Cyclin E蛋白在中、低浓度组则随着雌激素作用时间的延长,表达逐渐降低。随着孕激素作用浓度增加、作用时间延长,p57kip2 mRNA和蛋白的表达均逐渐增高,而高、中浓度组随着孕激素作用时间的延长,Cyclin E mRNA和蛋白的表达均逐渐降低。