论文部分内容阅读
目的：研究慢乙肝肝肾阴虚证、瘀血阻络证患者的白细胞基因表达谱及HBV前C区变异情况与相应证候之间的相关机制。 方法： 1．参照《1995年第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订，病毒性肝炎防治方案（试行）》（中华内科杂志，1995，（11）：788～791）为纳入及排除标准；《中国中医药学会肝病专委会，病毒性肝炎中医辩证标准（试行）》为辨证标准，分别于临床选取辨证符合肝肾阴虚证患者34人，以及瘀血阻络证患者40人。 2．抽取患者静脉血，分离血清，提取HBV-DNA，经PCR扩增反应，与乙型肝炎病毒前C区变异基因芯片杂交，将杂交后晾干之芯片用GenePix Personal4100A基因芯片扫描仪扫描。扫描图像用Imagene图像分析软件扫描结果进行定量分析。依据乙型肝炎病毒前C区变异基因芯片检测结果计算机自动进行结果判定。包括乙肝病毒前C区变异基因1896、1899、1862、1764、1762位点检测结果。计算各证型不同位点变异率（％）和不同位点野生株、变异株信号强度。所得数据中率的比较采用x2检验，计量资料采用t检验。 3．在两证型患者中各随机选取一人，抽取静脉血，分离白细胞，TRIzol法抽提总RNA，线性放大RNA后，用反转cDNA第一链标记制备荧光探针，并以QIAquick Nucleotide Removal Kit纯化荧光探针，将纯化好的探针转入酶标板，分别测定A260、A550、A650后，芯片杂交完成后，采用Genespring进行Normalize处理分析，最后ratio值为cy3／cy5（实验组／对照组）。差异基因筛选标准为ratio≥2为上调基因，ratio≤0.5为下调基因。所得数据用Microsoft Access、Microsoft Excel软件处理。 结果： 1．HBV前C区检测结果：HBV前C区变异率1762位点：肝肾阴虚证32.35％，瘀血阻络证92.5％，两证之间有显著性差异，P＜0.001；1764位点：肝肾阴虚证38.24％，瘀血阻络证90％，两证之间有显著性差异，P＜0.001；1896位点：肝肾阴虚证67.65％，瘀血阻络证30％。两证之间有显著性差异，P＜0.001。变异株信号强度：1762、1764、1899位点：瘀血阻络＞肝肾阴虚；1896位点：肝肾阴虚＞瘀血阻络。 2．白细胞基因表达谱检测结果：肝肾阴虚证：上调397条，下调628条。瘀血阻络证：上调435条，下调530条。两证型涉及生物学过程广泛，与细胞周期和免疫学相关有：NF-kappaB诱导激酶，CDK活动调节，RAS蛋白信号转导，RhoGTP酶激活子，MAPK通路，胰岛素样生长因子，JNK信号级连，整合素介导的信号通路，TNF与TNF受体活动，TGFβ受体，干扰素γ，白介素-1、-6、-10、-12，NO生物合成，前列腺素D2生物合成、白三烯B4生物合成与代谢等。 结论： 1．HBV前C区突变与肝肾阴虚证和瘀血阻络证有一定相关。 2．慢乙肝肝肾阴虚证和瘀血阻络证患者的白细胞基因表达谱与正常人不同。 3．肝肾阴虚证和瘀血阻络证患者白细胞基因表达谱两证型间存在不同，不同证型