论文部分内容阅读
目的:研究荔枝核总皂苷对Aβ诱导阿尔茨海默病(AD)大鼠神经元凋亡的抑制作用,并探讨其机制。方法:Morris水迷宫筛选学习记忆能力正常雄性SD大鼠,随机分为假手术组(12只)和手术组(68只)。手术组侧脑室注射10μg(2μg/lμ1)聚集态Aβ25-35制备AD模型,术后3周,Morris水迷宫筛选模型成功大鼠,随机分为模型组、0.42mg.kg-1多奈哌齐治疗组、0.12g·kg-1、0 24g.kg-1和0.47g.kg11荔枝核总皂苷治疗组;治疗组灌胃给药,1次/日,连续4周。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、连续冠状切片,原位末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学(SP法)染色,光镜下观察大鼠海马组经元凋亡、Akt和GSK-3β的表达,GD-10.0图像分析系统计算细胞凋亡指数(CAI),Image pro plus 6.0分析软件计算Akt和GSK-3β表达的平均光密度值(AOD);RT-PCR法检测大鼠海马组织Caspase-3 mRNA表达,凝胶分析软件Gel-Pro analyzer 4.0计算Caspase-3mRNA表达的平均灰度值(AGV)。结果:(1)大鼠学习记忆能力:与假手术组大鼠比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.01),跨越平台次数和平台象限停留时间明显减少(P<0.0l);与模型组相比,各剂量荔枝核总皂苷治疗组均可缩短大鼠逃避潜伏期(P<0.05,P<0.01),且增加大鼠跨越平台次数(P<0.01)、荔枝核总皂苷高剂量治疗组可增加平台象限停留时间(P<0.05);荔枝核总皂苷三剂量组间相互比较,定位航行第四、五天的大鼠逃避潜伏期差异明显(P<0.05),跨越平台的次数在低剂量和高剂量组间差异明显(P<0.05)。(2)光镜(×400)观察:①神经元凋亡:假手术组海马组织CA1区可见少数细胞胞浆浅染、细胞核呈颗粒状;模型组海马组织CA1区可见许多细胞固缩变圆、胞浆浓染、细胞核呈颗粒状,细胞凋亡指数显著增强(P<0.01);各剂量荔枝核总皂苷治疗组海马组织CA1区细胞核呈颗粒状的细胞均有减少,细胞凋亡指数降低(P<0.01),且荔枝核总皂苷三剂量组间差异明显(P<0.05,P<0.01)。②Akt表达:假手术组大鼠海马组织CA1区可见很多细胞胞浆中沉积棕褐色颗粒,模型组大鼠海马组织CA1区少见细胞胞浆中沉积棕褐色颗粒。各剂量荔枝核总皂苷治疗组大鼠海马组织CA1区胞浆有棕褐色颗粒沉积的细胞明显增多,且随着剂量的增加,更为明显。Akt表达阳性染色的平均光密度值,与假手术组比较,模型组明显降低(P<0.01);与模型组比较,各剂量荔枝核总皂苷治疗组的平均光密度均升高(P<0.01);荔枝核总皂苷三剂量组间相互比较,低剂量和高剂量组间差异明显(P<0.05)。③GSK-3β表达:假手术组大鼠海马组织CA1区少见细胞胞浆中沉积棕褐色颗粒,模型组大鼠海马组织CA1区胞浆中沉积棕褐色颗粒的细胞明显增加。各剂量荔枝核总皂苷治疗组大鼠海马组织CA1区胞浆有棕褐色颗粒沉积的细胞明显减少,且随着剂量的增加,更为明显。GSK-3β表达阳性染色的平均光密度值,与假手术组照组比较,模型组明显升高(P<0.01);与模型组比较,各剂量荔枝核总皂苷治疗组的平均光密度均降低(P<0.01);荔枝核总皂苷三剂量组间相互比较,低剂量和高剂量组间差异明显(P<0.05)。(3)Caspase-3mRNA表达:凝胶电泳图上,各组在445bp处均可见明显的扩增条带,为β-actin mRNA扩增条带;在218bp处有强弱不等但边界清楚的扩增条带为Caspase-3 mRNA扩增条带。与假手术组照组比较,模型组大鼠海马组织中Caspase-3 mRNA的RT-PCR扩增条带明显增强且Caspase-3 mRNA表达的平均灰度值明显增加(P<0.01);与模型组相比,荔枝核总皂苷各剂量治疗组大鼠海马组织中Caspase-3 mRNA的RT-PCR扩增条带均减弱且Caspase-3 mRNA表达的平均灰度值均降低(P<0.01,P<0.05)。荔枝核总皂苷三剂量组间相互比较,低剂量和高剂量组间差异明显(P<0.05)。结论:1.大鼠侧脑室注射Aβ25-35成功复制了大鼠阿尔茨海默病模型。2.荔枝核总皂苷可抑制Aβ25-35诱导的AD大鼠海马神经元凋亡,且具有一定剂量依赖性。3.荔枝核总皂苷可抑制AD大鼠海马神经元凋亡的可能途径:(1)激活PI3K/Akt胰岛素信号通路的Akt→降低GSK-3β活性,进而减少Caspase-3表达,减弱Caspase-3触发的凋亡级联反应。(2)激活PI3K/Akt胰岛素信号通路的Akt→Akt直接抑制Caspase-3表达,进而减弱Caspase-3触发的凋亡级联反应。