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目的:通过体内外实验探索八宝丹对胃癌血管新生和淋巴管新生的影响,并从VEGF/VEGFR(VEGF-A/VEGFR-2和VEGF-C/VEGFR-3)通路阐明八宝丹抑制胃癌血管新生和淋巴管新生的作用机制,进而为其临床治疗肿瘤提供实验依据。方法:体内实验:构建MGC80-3皮下移植瘤裸鼠模型,按照瘤体体积将小鼠随机分为对照组(Control组)与BBD组,BBD组按照0.25 g/kg进行灌胃,对照组进行等体积的生理盐水灌胃,每周给药为6天,休息1天,间隔1天检测裸鼠瘤体的体积大小,连续给药4周后处死裸鼠,眼眶取血法采集血液,剥离瘤体组织称重并分成2份,其中1份保存于液氮之中,另外1份立即进行组织包埋;免疫组化(IHC)检测瘤体组织的微血管密度(CD31表达)和微淋巴管密度(LYVE-1表达)以观察血管新生和淋巴管新生;酶联免疫吸附试验(ELISA)观察血清中VEGF-A和VEGF-C的含量;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测瘤组织中VEGF-A、VEGF-C、VEGFR-2、VEGFR-3的蛋白表达。体外实验:不同浓度的BBD干预胃癌细胞株(AGS,BGC823,MGC80-3),采用MTT比色法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)观察蛋白VEGF-A和VEGF-C的分泌及表达。用外源性因子VEGF-A和VEGF-C分别刺激HUVEC和HLEC细胞,采用管腔生成实验(Tube Formation)检测BBD干预对管腔形成能力(血管生成、淋巴管生成)的影响;采用MTT比色法观察BBD干预对HUVEC和HLEC后细胞活力的影响;采用Hochest33258染色观察BBD干预对细胞凋亡的影响;采用Transwell法和细胞划痕实验观察BBD干预对细胞迁移能力以及损伤修复能力的影响;采用WB检测BBD干预对血管新生和淋巴管新生的相关蛋白VEGF-A、VEGF-C、VEGFR-2、VEGFR-3、MMP-2、MMP-9表达的影响。结果:体内实验:实验结果显示BBD对胃癌移植瘤体积和重量都有一定的抑制作用(P<0.05或P<0.01),且无不良反应;IHC实验结果显示BBD能够抑制胃癌移植瘤血管新生和淋巴管新生(P<0.01);ELISA实验结果显示BBD能够降低血清中VEGF-A与VEGF-C的含量(P<0.05);WB实验结果显示BBD能够下调VEGF-A、VEGF-C、VEGFR-2、VEGFR-3相关蛋白的表达水平(P<0.01)。体外实验:MTT实验结果显示BBD能够抑制胃癌细胞(AGS,BGC823,MGC80-3)的增殖(P<0.01);ELISA与WB实验结果显示BBD能够抑制蛋白VEGF-A与VEGF-C的分泌与表达(P<0.01)。Tube Formation实验结果显示BBD能够抑制血管生成和淋巴管生成(P<0.01);MTT实验结果显示BBD能够抑制HUVEC和HLEC的细胞活力(P<0.01);Hochest33258染色结果显示BBD能够促进HUVEC和HLEC的凋亡(P<0.05或P<0.01);Transwell法和细胞划痕实验结果显示BBD能够抑制HUVEC和HLEC的迁移能力以及损伤修复能力(P<0.01);WB实验结果显示BBD能够下调VEGF-A、VEGF-C、MMP-2、MMP-9、VEGFR-2、VEGFR-3相关蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:BBD在体内外均能够通过VEGF/VEGFR通路抑制着胃癌的发生,并且能够对血管生成和淋巴管生成都有显著的抑制作用。