目的:探索不同培养基、不同培养时间和不同蛋白质提取方法对侵袭性丝状真菌质谱鉴定准确率的影响,旨在提高基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术鉴定侵袭性丝状真菌的准确率。方法:采用分子生物学方法为金标准,同时运用传统形态学方法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对所收集临床丝状真菌进行鉴定。根据分子生物学的鉴定结果,去除VITEK-MS V3.0数据库中没有的菌株,其余菌株接种在三种不同的培养基中(SDA、PDA和CA),采用两种不同的蛋白质提取方法(甲酸乙腈法和磁珠法),获得了不同培养时间点(2、3、5、7和9天)的特异性质谱指纹图谱。结果:不同丝状真菌蛋白质提取方法进行比较,甲酸乙腈法总鉴定准确率为79.8%,磁珠法总鉴定准确率为77.5%,两种丝状真菌蛋白质提取方法的质谱鉴定准确率无显著性差异(χ2=1.040,P=0.308)。不同培养基进行比较,SDA培养基总鉴定准确率为90.7%,PDA培养基总鉴定准确率为81.4%,CA培养基总鉴定准确率为67.4%,三种不同培养基的丝状真菌质谱鉴定准确率有显著性差异(χ2=36.609,P=0.000),其中使用SDA培养基鉴定准确率最高,使用CA培养基鉴定准确率最低(SDA VS PDA,χ2=7.748,P=0.005;SDA VS CA,χ2=35.131,P=0.000;PDA VS CA,χ2=10.994,P=0.001)。不同培养时间进行比较,丝状真菌培养2天、3天、5天、7天和9天后的质谱总鉴定准确率分别为64.3%、88.4%、89.1%、79.1%和78.3%,不同培养天数的质谱鉴定准确率有显著性差异(χ2=32.274,P=0.000)。培养3天和培养5天的质谱鉴定准确率优于培养7天和培养9天的质谱鉴定准确率,培养2天的质谱鉴定准确率明显低于其它天数(3天VS 5天,χ2=0.039,P=0.844;7天VS 9天,χ2=0.023,P=0.879;3天VS 7天,χ2=4.095,P=0.043;2天VS 9天,χ2=6.139,P=0.013)。结论:侵袭性丝状真菌使用SDA培养基培养3天,运用甲酸乙腈法提取蛋白质进行质谱鉴定最理想。