β-1,4半乳糖基转移酶-I与瘢痕疙瘩胶原合成的初步研究

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目的:研究β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase-I,β-1,4GalT-I)在瘢痕疙瘩中的表达变化,以及β-1,4GalT-I与胶原合成的关系,初步探讨β-1,4GalT-I在瘢痕疙瘩纤维化进程中的作用。方法:收集瘢痕疙瘩标本10例,同时以正常人皮肤6例、增生性瘢痕7例作对照,常规制备冰冻切片,H-E染色、饱和苦味酸-天狼猩红偏振光法观察组织学结构及胶原的形态与分布,运用形态学图象分析软件计算组织中I、III型胶原的比例;试剂盒法检测标本中的羟脯氨酸(Hydroxyproline, HP)含量,估算其中胶原蛋白的含量,观察瘢痕疙瘩胶原合成情况;采用半定量RT-PCR法观察瘢痕疙瘩中β-1,4GalT-I的表达变化,以各泳道中β-1,4GalT-I与GAPDH条带的光密度比值表示β-1,4GalT-I mRNA的相对表达量,使用Stata7.0统计学软件进行单因素方差分析和两两比较,并应用相关分析判断各组织中β-1,4-GalT-I mRNA表达量与组织中胶原含量的相关性。结果:⑴与正常人皮肤相比,瘢痕疙瘩中真皮乳头层丰富,网状层增厚,含有大量胶原纤维束,粗大致密,排列密集,呈漩涡状的结节或板层状,其中成纤维细胞、毛细血管以及炎症细胞亦增多。⑵偏振光显微镜显示瘢痕疙瘩组织中含有大量且粗大致密的,发出强烈的红或黄色双折射光的I型胶原纤维,呈大块状或条索状分布,多呈波纹状平行排列,构成致密的宽带状纤维结构,约占(71.53±4.03)%;在I型胶原纤维束的周围区域可见散在的、发弱的绿色双折射光的、呈疏网状的III型胶原细纤维,约占(28.47±4.03)%,I、III型胶原比例为(2.56±0.53);与正常人皮肤组比较均有统计学意义(P<0.05);与增生性瘢痕组比较差异无显著性(P>0.05)。⑶瘢痕疙瘩组织中HP含量为(10.98±1.55)μg/mg,明显高于正常人皮肤组织(5.38±0.47)μg/mg,差异有统计学意义(P<0.01),与增生性瘢痕组(10.21±1.25)μg/mg比较差异无显著性(P>0.05),提示瘢痕疙瘩和增生性瘢痕纤维化程度明显高于正常人皮肤组。⑷瘢痕疙瘩组织中β-1,4-GalT-I mRNA的相对表达量为(0.2995±0.0825),也明显高于正常人对照(0.0451±0.0287),差异有统计学意义(P<0.01),与增生性瘢痕组(0.2769±0.0975)比较差异无显著性(P>0.05);β-1,4-GalT-I表达的高低与组织中胶原的含量具有相同的变化趋势,二者成正相关关系(r=0.9507,P<0.01)。结论:β-1,4-GalT-I表达的高低与瘢痕疙瘩组织中胶原合成密切相关,β-1,4-GalT-I可能参与了瘢痕疙瘩的发病过程并在胶原合成过程中发挥重要作用。目的:研究瘢痕疙瘩组织中β-1,4-糖苷键的合成及定位,探讨糖蛋白半乳糖基化作用在瘢痕疙瘩形成中的作用。方法:提取组织蛋白利用Lectin blotting法观察Galβ-1→4GlcNAc在瘢痕疙瘩组织中的表达;再利用特异性结合Galβ-1→4GlcNAc的RCA-I凝集素免疫荧光组织化学法检测Galβ-1→4GlcNAc在瘢痕疙瘩组织中的表达与定位,并与I型前胶原α1共定位,比较β-1,4-糖苷键在三组组织中的表达变化。结果:⑴糖链染色结果发现,瘢痕疙瘩组织中的Galβ→1,4GlcNAc糖链结构与正常人皮肤组织之间有着细微的差别,在约30KD和40KD处的糖蛋白表达略增高,这表明瘢痕疙瘩组织中的部分糖蛋白半乳糖基化发生了相应的改变。⑵荧光显微镜下观察组化结果发现RCA-I受体——Galβ-1,4GlcNAc group基本均匀分布在瘢痕疙瘩组织成纤维细胞胞膜和细胞浆内,与正常人皮肤相比,该受体的表达量明显增加;增生性瘢痕组织成纤维细胞中有类似的表现。⑶RCA-I受体与I型前胶原α1有很好的共定位,主要位于成纤维细胞细胞膜和细胞浆内,在增生性瘢痕组织成纤维细胞中分布大致相同,表达量也明显增加,。结论:Galβ-1,4GlcNAc在瘢痕疙瘩组织中的表达量发生了变化,提示Galβ-1,4GlcNAc可能参与了瘢痕疙瘩修复过程中纤维过度形成的修饰调控。
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