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本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分:Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中miR-181a的表达及其意义 目的:Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中miR--181a表达及相关性 方法:1、选择2011年1月-2013年12月,南方医科大学附属小榄医院收治的41例子宫内膜癌患者及中山大学附属中山医院收治的4例、南方医科附属南方医院收治的2例Ⅱ型子宫内膜癌患者。为了解子宫内膜癌变的发生发展过程,同时选取了南方医科大学附属小榄医院收治的子宫内膜增生症患者18例,正常子宫内膜患者13例。患者年龄24-69岁,平均48岁。术前均未行放化疗及内分泌治疗,术后诊断均经病理证实。 2、子宫内膜癌组织均经免疫组织化学染色检测其中ER、PR表达:以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性信号,否则为阴性。根据组织切片染色结果分Ⅰ型子宫内膜癌(ER、PR均阳性)和Ⅱ型子宫内膜癌(ER、PR均阴性)。 3、总RNA提取:每例石蜡标本连续切片10张,每张厚10μm,取组织细胞含量在50%以上区域的切片每例2-5张(平均4张)制备总RNA。将切片放入1.5mL无水乙醇洗涤2次去除残余二甲苯。彻底干燥后严格按照QIAGEN总RNA提取试剂盒说明书提取总RNA。 4、紫外线分光光度计检测提取的总RNA的吸光度(OD值),采用1%琼脂糖变性凝胶电泳检测RNA的完整性。 5、通过microRNA茎环引物进行逆转录,以U6为内参,采用SYBR green实时荧光定量PCR技术检测各组子宫内膜组织中miR-181a的表达。反应参数为95℃预变性6min;95℃变性10s;55℃退火10s;72℃延伸30s,共50个PCR循环。记录Ct值。miRNA相对表达量即△Ct=Ct(miR-181a)-CtU6,计算△△Ct=(Ct(miR-181a)-CtU6)实验组-(Ct(miR-181a)-CtU6)对照组,各实验组miR-181a相对对照组的表达倍数以Folds=2-△△Ct表示。 结果:1、各组子宫内膜组织中miR-181a的表达:miR-181a在正常子宫内膜组织中可见表达,与正常子宫内膜组相比,miR-181a在子宫内膜癌组织、子宫内膜增生症组织中表达(△Ct值分别为-3.356±2.401、-1.893±2.568)分别上调11.228倍(P<0.05)、4.073倍(P<0.05)。且子宫内膜癌组织miR-181a的表达是子宫内膜增生症组的2.757倍(P<0.05)。 2、Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌组织miR-181a的表达:与正常组相比,Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌组织中miR-181a的表达(△Ct值分别为-2.957±2.453、-4.832-1.524)分别上调8.515倍(P<0.05)和31.233倍(P<0.05);且Ⅱ型子宫内膜癌组织中miR-181a表达是Ⅰ型内膜癌组织的3.668倍(P<0.05)。与子宫内膜增生症组相比,miR-181a在Ⅰ型和Ⅱ型内膜癌组中的表达分别上调2.091倍(P>0.05,差异无统计学意义)、7.669倍(P<0.05)。 结论:从正常子宫内膜,到子宫内膜增生症,再到子宫内膜癌,miR-181a的表达呈逐渐上调的趋势,miR-181a在子宫内膜癌变过程中能参与了子宫内膜癌形成的早期分子事件,起到了癌基因的作用,甚至有望成为子宫内膜癌的早期筛查及诊断标志物。然而在子宫内膜增生症组织中miR-181a的表达相对Ⅰ型子宫内膜癌差别无统计学意义,相对Ⅱ型子宫内膜癌组织则显著降低,Ⅱ型子宫内膜癌组织中miR-181a的表达明显高于Ⅰ型,miR-181a的这种差异表达可能在不同类型内膜癌的发生、发展过程中发挥重要作用,尤其与Ⅱ型子宫内膜癌的发病机制相关。 第二部分:Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中CA125的表达及其与miR-181a的相关性 目的:Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中CA125的表达及其与miR-181a的相关性 方法:将第一部分中子宫内膜组织标本均经过4%甲醛固定,常规作石蜡包埋切片,厚约4um,采用MaxVisionTM免疫组织化学染色法检测组织中CA125表达。实验步骤严格按MaxvisionTM检测试剂盒KIT-5001说明书操作。完全不染色:阴性(-);CA125阳性染色:在细胞膜和(或)细胞质出现棕黄色颗粒。弱阳性(+):染色呈浅棕色,且阳性细胞率小于10%(观察10个高倍视野);中等阳性(++):染色介于(+)与(+++)之间,阳性细胞率10%-50%;强阳性(+++):CA125染色呈深棕黄色,结构清晰,阳性细胞率大于50%。 结果:1、正常子宫内膜组织中的CA125的表达以弱阳性为主,子宫内膜增生症和子宫内膜癌组织中则以中等阳性及强阳性为主。子宫内膜癌中,Ⅰ型内膜癌中以强阳性表达为主,Ⅱ型内膜癌中以中等阳性为主。且不同类型子宫内膜癌组织中CA125表达差异有统计学意义(Z=-4.717,P<0.05)。 2、子宫内膜癌变过程中miR-181a与CA125表达的相关性:在子宫内膜癌变过程中,miR-181a与CA125的表达呈负相关关系(P=0.026,r=-0.25)。 结论:子宫内膜癌变过程中,CA125与miR-181a的表达呈负相关,这可能与低分化、恶性程度高的子宫内膜癌中CA125表达减弱的现象有关。 全文结论:miR-181a在Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌间的表达差异可能与不同类型内膜癌的发生、发展相关。miR-181a可能参与了子宫内膜癌的发生发展,尤其是Ⅱ型内膜癌,起到了癌基因的作用。其机制可能是miR-181a通过调控CA125的表达而影响子宫内膜癌变,但具体作用机制尚需细胞水平实验的验证。