乌鲁木齐地区乳源金黄色葡萄球菌污染调查及生物膜形成特性检测

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金黄色葡萄球菌在自然界中广泛分布,是一类人畜共患病原菌,易造成奶牛乳房炎继而对乳品造成污染。它也是常见的食源性致病菌,能通过携带的肠毒素引发食物中毒事件,严重时危及生命安全。生物膜是细菌的一种自我保护形式,使其不仅能在恶劣的环境下长时间存活,还能抵御宿主的免疫应答及常规的消杀作用。随着人们对营养需求的增加,乳品被污染带来的安全隐患值得深思。由于乌鲁木齐地区生牛乳及市售散装生牛乳的污染调查较空白,所以本研究对乌鲁木齐地区生牛乳中的金黄色葡萄球菌的流行情况、菌株间经典肠毒素的携带情况及生物膜形成相关特性进行研究,以期为该地区生牛乳中金黄色葡萄球菌的防控提供参考依据。本研究试验结果如下:1.从乌鲁木齐地区共采集到乳样1 037份,通过选择性培养基进行分离纯化,运用PCR方法结合鉴别培养基进行鉴定,通过16S r RNA序列在NCBI上的比对,共分离出金黄色葡萄球菌86株,分离率为8.29%。对不同来源的13株生牛乳中分离得到的金黄色葡萄球菌进行同源性和遗传进化分析,菌株同源性在93.7%~99.7%之间,遗传差异在0.3~6.6之间,结果显示不同来源的菌株之间同源性高、遗传差异小。86株分离株中检出1株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。2.通过PCR方法对金黄色葡萄球菌经典肠毒素进行检测,86株菌中有34株菌(39.53%)不携带任何经典肠毒素基因,52株菌株(60.47%)携带经典肠毒素基因,且存在一株菌株携带多种经典肠毒素基因的情况。其中携带sea的有21株菌(24.42%),携带seb的有23株菌(26.74%),携带sec的有8株菌(9.3%),携带sed的有18株菌(20.93%),所有菌株均不携带see基因。携带一种肠毒素的菌株有37株,携带两种肠毒素的菌株有12株,携带三种肠毒素的菌株有3株。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌只携带sea基因。3.通过96孔板法对成膜能力进行检测,PCR方法对9个相关成膜基因进行检测,86株菌中70株菌具有强成膜能力,8株菌具有中等成膜能力,4株菌具有弱成膜能力,4株菌不具有成膜能力。携带fnb A基因的菌株占12.79%,携带fnb B基因的菌株占23.26%,携带clf A基因的菌株占56.98%,携带clf B基因的占89.53%,携带cna基因的菌株占9.3%,携带sar A基因的菌株占65.12%,携带ccp基因的菌株占45.35%,携带lux S基因的菌株占62.79%,未检测到ica A基因。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为强成膜能力菌株,携带clf B和sar A这两种成膜基因。以上结果表明,乌鲁木齐地区生牛乳中存在一定程度的金黄色葡萄球菌污染情况,通过遗传进化及同源性分析,说明菌株可能存在运输和销售环节中的外源性二次污染,也存在水平传播的可能;分离株中经典肠毒素的携带率较高,且以seb和sea型为主,增大了食物中毒的风险;分离株中生物膜成膜能力较强,且普遍存在携带多种成膜基因的情况,结果表明金黄色葡萄球菌生物膜的形成与粘附因子、调控基因存在联系,是由多基因共同协作调控的作用结果,为金黄色葡萄球菌污染防控带来一定挑战性。
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