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丙酮酸是生物细胞内EMP循环中的中间产物,不仅在生物能量代谢中具有十分重要的作用,而且是多种有用物质的前体。因此,它在化工、农药和农用化学品等工业及学科研究中有着广泛的用途。目前丙酮酸生产使用的大部分为光滑球拟酵母,多为硫胺素、生物素、吡哆醇、烟酸四种维生素营养缺陷型。该菌为条件致病菌,存在潜在的安全威胁,而通用来生产酒精的酿酒酵母耐性较强且公认为安全菌,因此本论文以酿酒酵母为研究对象,选育能积累丙酮酸的菌株。首先,以Saccharomyces cerevisiae Y2为出发菌株,把pdcl基因敲除片段(P1K)用电穿孔转化法转化到出发菌株S. cerevisiae Y2中,在含G418抗性的YEPD平板上筛选转化子,通过PCR和southern blot验证得到pdcl基因的敲除菌株S. cerevisiaeY2-1。然后,把pdc5基因敲除菌株敲除片段(P5H)用醋酸锂转化法转入到S. cerevisiaeY2-1中,在YNBG平板上筛选转化子,通过PCR和southern blot验证得到pdcl和pdc5基因都缺失的菌株S. cerevisiae Y2-15。最后,对其S. cerevisiae Y2-15的种子培养基、发酵培养基和发酵条件进行了优化。优化后的种子培养基为(g/L)：葡萄糖30,蛋白胨10,酵母粉5,KH2PO41, MgSO4·7H2O0.5,醋酸钠2,玉米浆0.5%,pH5.6。优化后的发酵培养基组成为(g/L)：葡萄糖80,蛋白胨20,酵母粉10,醋酸钠2.5,玉米浆1%,KH2PO41, MgSO4·7H2O0.5,金属离子母液5mL, pH5.6。优化后的发酵条件为：种龄26h、接种量12%,装液量70mL/250mL三角瓶。S. cerevisiae Y2-15优化后的丙酮酸的积累量为24.85g/L比优化前提高168%。