第一部分：p-FGFR1Y654在食管鳞癌中的表达　　研究背景：　　食管癌是全世界第六大恶性肿瘤，在我国以食管鳞状细胞癌为主。尽管随着各种治疗方法的进展，其预后仍然较差，5年生存率依然不到 40%。 近年来，在食管鳞癌中通过基因组分析发现了许多 DNA 拷贝数的改变，比如SOX2、PI3KCA、CCND1、FGFR等。这些与肿瘤相关的高拷贝数的变化提示了食管鳞癌的治疗潜在靶点。细胞蛋白的酪氨酸磷酸化在控制细胞进展中也起着非常重要的桥梁作用，FGFR在Y653和Y654位点的自身磷酸化与FGFR的活性有着密切关系，而且在FGFR驱动的肿瘤细胞株中p-FGFR主要在FGFR扩增的细胞中高表达。有研究报道在肝细胞肝癌中p-FGFR的表达可能导致了细胞株对MET抑制剂的耐药。而p-FGFR1与食管鳞癌的关系目前未见有相关报道。　　研究目的：　　观察磷酸化FGFR（p-FGFR1Y654）在食管鳞癌组织和细胞中的表达，并探讨其对食管鳞癌术后的预后价值　　研究方法：　　按纳入标准（入组标准：患者术前均未行放化疗、靶向治疗 ；手术切除边缘均未见癌组织；均未有远处器官转移。术后均给予辅助放疗54-60Gy/27-30F。排除标准 ：入选前有心肺功能不全 、肝肾功不全 、糖尿病和严重感染性疾病等基础疾病患者；术前进行放疗或化疗；术前诊断为远处转移不可根治切除；手术切缘阳性；未进行正规治疗）严格筛选我院2008年12 月至2014年12月经病理诊断证实为食管鳞癌患者共87例，并行根治切除。患者中男性73例，女性14例；中位年龄60岁。吸 烟 量≥1包/天持续1年以上被认为是吸烟者 ，吸烟 54例，不吸烟 33例；临床分期和病理分化等级均依据第八版AJCC食管癌分期标准。其中低分化21例，中分化36例，高分化16例。免疫组化法检测p-FGFR1 Y654在原发灶组织中的表达情况，定义高于75%分位数值为高表达，相反为低表达，分析其与相关临床病理参数和预后的相关性。Western blot检测食管鳞癌细胞株（TE10、ECA109、EC9706、PTEN-KO-ECA109）p-FGFR1 Y654表达。卡方检验分析比较p-FGFR表达与临床病理特征之间的关系。　　研究结果：　　在4个食管鳞癌细胞TE10、Eca109、EC9706、PTEN-KO（PTEN敲除的ECA109）细胞株中，Western blot发现TE10的p-FGFR1Y654高表达，其他细胞相对表达较低。同时免疫组化检测食管鳞癌组织中p-FGFR1 Y654表达，全组人群p-FGFR1 Y654表达百分比中位数和75%分位数分别为10%，30%。将≥30%患者定为高表达组，<30%为低表达组。共入组的87例食管癌病例中高表达者26例，低表达61例。所有基线特征中，只有肿瘤部位与p-FGFR1 Y654表达水平有显著相关性，高表达组中下段食管癌比例高于低表达组　　结论：　　p-FGFR1 Y654在食管鳞癌组织和细胞中均存在表达差异，且肿瘤部位与p-FGFR1 Y654表达水平有显著相关性。　　第二部分：AZD4547增强吉非替尼对食管鳞癌细胞的敏感性及其相关机制　　研究背景：　　以往研究提示30%-90%食管癌患者伴有EGFR高表达。但是在食管癌中EGFR蛋白表达是否作为EGFR TKI获益的预测性生物指标仍有争议。Fumikata Hara等在部分食管鳞癌细胞中探索了吉非替尼效果，结果提示这部分高表达EGFR的食管鳞癌细胞在体内和体外都显示了明显的抑制效果。虽然EGFR TKI作为晚期食管鳞癌的二、三线治疗方案，但是会很快产生耐药。Dutton等一项多中心、III期随机对照研究探索了吉非替尼在晚期食管癌中作为二线治疗的效果，结果提示晚期食管癌患者并不能从吉非替尼单药治疗中获益；新的报道提示EGFR扩增的这部分食管鳞癌患者能从单药吉非替尼治疗中获益，但是由于食管鳞癌高度复杂的基因突变情况，单一的标志物并不能完全预测吉非替尼单药获益。其他关于EGFR单克隆抗体在食管癌中的研究也未显示出可参考的阳性结果。总之，EGFR TKI在食管癌中单独应用疗效目前不容乐观，有必要在联合治疗上进一步探讨。有研究报道在肝细胞肝癌中p-FGFR的表达可能导致了细胞株对MET抑制剂的耐药。AZD4547是pan-FGFR抑制剂，在细胞水平上能强有力地抑制p-FGFR和下游信号通路。然而，在食管鳞癌中p-FGFR是否介导EMT从而导致对EGFR TKI耐药并不清楚。　　研究目的：　　探讨在食管鳞癌细胞中FGFR抑制剂AZD4547能否通过抑制p-FGFR1 Y654从而提高吉非替尼对食管鳞癌的敏感性以及相关机制。　　研究方法：　　CCK-8检测吉非替尼单药和联用AZD4547对食管鳞癌细胞活力的影响。实时荧光定量RT-PCR检测EMT标志物mRNA表达。流式细胞术检测细胞周期，Western blot检测相关蛋白表达。　　研究结果：p-FGFR1Y654和p-AKT473均在具有间叶表型的TE10细胞中高表达，在上皮表型的EC9706细胞中低表达。吉非替尼单药抑制TE10和EC9706细胞活力的IC50分别为22.9±2.1 μM、9.85±5.5 μM。联合AZD4547，吉非替尼抑制TE10和EC9706细胞活力的IC50分别为4.13±0.12 μM、3.21±0.76 μM。在TE10和EC9706细胞中，AZD4547可能分别通过抑制PI3K/AKT通路和MAPK/ERK通路起到对吉非替尼的增敏作用。　　结论：　　AZD4547主要提高食管鳞癌间质表型的细胞对吉非替尼的敏感性。p-FGFR1Y654和 p-AKT473可潜在地作为食管鳞癌间叶表型的标志物和 AZD4547 联合吉非替尼治疗食管鳞癌的预测指标。