论文部分内容阅读
斜纹夜蛾Spodoptera litura F.是我国粮、棉、烟草、蔬菜等作物的重要害虫,其成灾因子主要是繁殖力高,爆食性、杂食性,世代重叠以及迁飞性。斜纹夜蛾具远距离迁飞能力,这是其异地爆发成灾的主要原因,也是目前斜纹夜蛾防治的制约因素。本研究旨在通过斜纹夜蛾飞行肌蛋白flightin基因的研究,探索斜纹夜蛾飞行的分子机制,为斜纹夜蛾防治研究提供思路。本研究通过PCR及RACE技术,获得了斜纹夜蛾flightin全长mRNA序列,该序列全长805bp,其开放阅读框(ORF)483bp,可编码一个有160个氨基酸残基的蛋白。斜纹夜蛾flightin与冬尺蠖蛾等鳞翅目昆虫的flightin具有较高的同源性(>75%),但与鞘翅目,双翅目等昆虫的flightin的同源性较低(<40%)。通过实时荧光定量技术检测了flightin在斜纹夜蛾各个发育阶段的相对表达量,结果显示flightin在斜纹夜蛾中自幼虫至成虫期均有表达,在幼虫期表达量低,蛹期开始激增,在刚羽化成虫中表达量达到了最高值。雌虫flightin相对表达量比雄虫高。进一步检测了flightin在雌雄成虫羽化后0d、1d、2d不同组织中的相对表达量,结果表明在羽化后三天时间里flightin的相对表达量均为:头部>胸部>生殖系统。在雌虫和雄虫胸部,flightin的表达在0d最高,随后急速下降。在雌虫生殖系统,flightin的表达在0d最低,但在随后两天里显著升高。在雄成虫生殖系统,flightin表达量在羽化后三天里维持在相同水平。进一步通过dsRNA饲喂和注射对成虫flightin干扰效率进行了研究。结果显示,饲喂dsRNA后所有成虫均不羽化。注射5μg及7.5μg fllightin dsRNA成功干扰了flightin表达,干扰后flightin表达下降情况为:5μg处理雌虫31%,5μg处理雄虫39%,7.5μg处理雌虫50%,7.5μg处理雄虫51%。本研究首次获得了斜纹夜蛾flightin全长mRNA序列。表达分析发现在成虫胸部,flightin的表达呈先高(0d)后低(1d、2d)模式,与迁飞行为发生相符。首次发现斜纹夜蛾flightin在成虫生殖系统表达,且在雌虫生殖系统表达量随日龄的变化呈先低(0d)后高(1d、2d)模式(与其在胸部表达量变化趋势相反),与该蛾的性成熟与生殖行为发生呈正相关。本研究具有创新性,研究结果为斜纹夜蛾flightin基因的功能研究提供了新的启示。