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目的:通过检测CFTR及Wnt/β-catenin信号通路的目标靶基因(Wisp-1和Axin)以及关键核心因子(β-catenin)在燃煤型氟斑牙仔鼠牙胚中的表达变化,明确氟作用于CFTR的关键时间靶点,并初步探讨CFTR及Wnt/β-catenin信号通路表达变化在燃煤型氟斑牙发病中的相关机制,为氟斑牙特异性阻断和靶向治疗提供新的理论依据。方法:1、课题组前期已成功复制燃煤型氟中毒的大鼠模型,本实验在此基础上继续合笼产仔;取同代出生后0(Postnetal 0 day,P0)、1(P1)、7(P7)、14(P14)和20(P20)天处于釉质形成期的仔鼠牙胚组织样本各12个;2、应用实时荧光定量PCR技术检测仔鼠下切牙牙胚中CFTR m RNA在以上各时间点中的表达变化。3、通过Western blot和实时荧光定量PCR检测仔鼠下切牙牙胚中β-catenin蛋白,Wisp-1和Axin m RNA在以上各时间点的表达变化。结果:1、在正常仔鼠下切牙牙胚中CFTR m RNA的表达随着时间的增加呈逐渐增加趋势,P14和P20表达升高显著(P﹤0.01)。在实验组中CFTR m RNA的表达则随着时间的增加呈下降趋势,P14和P20表达下降显著(P﹤0.01)。两组在同一时间点比较,实验组P0和P1中CFTR m RNA的表达量高于对照组(P﹤0.01);P7、P14和P20低于对照组,P7差异无统计学意义,P14和P20差异均有统计学差异(P﹤0.01)。2、在正常组和实验组仔鼠下切牙牙胚中β-catenin蛋白的表达均随着时间的增加而增加,其中实验组的增加更显著。同组内相邻时间点比较,两组各天数之间差异均有统计学意义(P﹤0.05),除了实验组中P0和P1;不同组在同一时间点比较,实验组各时间点CFTR的表达量均高于对照组,且差异有统计学意义(P﹤0.05)。3、在正常组和实验组仔鼠下切牙牙胚中Wisp-1m RNA表达量均从第0天开始增加,相邻时间点比较增加趋势不显著。在同一时间点比较,实验组各时间点中Wisp-1m RNA的表达量均高于对照组,且差异均有统计学意义(P﹤0.05),除了P0。4、在正常仔鼠下切牙牙胚中Axin m RNA表达水平从P0至P14逐渐升高,P20降低。在实验组中,P1表现为下降,P7表现为升高,P14再次下降,P20再次升高。在同一时间点比较,实验组中P0和P20的表达量高于对照组(P﹤0.05);P1、P7和P14的表达量低于对照组,P7差异无统计学意义,P1和P14差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论:1、过量氟可影响成釉细胞成熟期(釉质矿化期)CFTR的表达。2、在高氟环境下成釉细胞成熟期CFTR表达抑制后,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin蛋白和Wisp-1 m RNA过表达,Axin m RNA低表达。3、成釉细胞成熟期CFTR表达抑制与Wnt/β-catenin信号通路过度激活可能与燃煤型氟斑牙的发病有关。