6个矮牵牛品种抗旱性评价及PSARK-IPT基因转化矮牵牛研究

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矮牵牛是常用的园林观赏花卉之一,因我国“节约型园林”建设的需求,筛选培育抗旱性强的矮牵牛品种具有重要价值。本文以6个不同品种的矮牵牛为材料,测定种子在4种PEG-6000浓度梯度下发芽率、发芽势、发芽指数、平均发芽天数及植株在4种水分梯度下形态、光合特性及生理变化等13个指标,利用隶属函数公式对矮牵牛品种种子及植株的抗旱性进行综合评价分析。筛选得到抗旱性较差的矮牵牛品种进行PSARKIPT基因的转化,以提高矮牵牛品种的抗旱能力。研究结果如下:(1)6个矮牵牛品种种子干旱胁迫中,随PEG-6000浓度的升高,发芽率、发芽势、发芽指数均逐渐下降,平均发芽天数逐渐升高,各品种矮牵牛种子萌发受到不同程度的抑制,其中‘梅林’受抑制作用最为显著。植株干旱胁迫试验中,随土壤含水量的降低,植株花径、株高及开花植株比率逐渐降低;净光合速率、蒸腾速率呈降低趋势,水分利用率先升高后降低;叶片相对含水量及叶绿素含量逐渐降低,SOD、POD、CAT等酶的活性及丙二醛、可溶性蛋白的含量呈升高的趋势,不同品种的变化幅度不同。利用隶属函数分析得到6个矮牵牛品种种子及植株的抗旱性强弱顺序相同,依次为:‘仙境’>‘豪放’>‘极美’>‘水中花’>‘依格’>‘梅林’。种子及植株抗旱性强弱存在一定相关性,种子抗旱性强的品种,植株也表现较强的抗旱性。(2)建立矮牵牛‘梅林’组培再生体系,得到MS+2.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA为愈伤及芽分化最适培养基,叶片诱导率及出芽率分别为100%,7.31;诱导茎段增殖,最适的激素浓度为0.5 mg·L-1ZT,增殖系数为6.48;最佳生根培养基为1/2MS+0.05mg·L-1IBA,生根率为95.34%,生根系数为7.95。移栽后,成活率达96.67%。(3)建立矮牵牛‘梅林’遗传转化体系,将具有增强抗旱功能的PSARK-IPT基因转入‘梅林’。以潮霉素作为遗传转化中的筛选标记,选择2mg·L-1Hey为叶片分化筛选压;4mg·L-1的Hey为最佳生根筛选压;以头孢作为抑菌剂,发现500mg·L-1的Cef为最适抑菌浓度;以预培养时间2d,农杆菌侵染浓度OD600=0.5,侵染时间3min,共培养时间36h为遗传转化体系进行基因转化,结果获得抗性芽,对抗性芽进行生根筛选,获得15株抗性植株。对抗性植株进行PCR检测获得12株转基因植株,选择8株进行RT-PCR检测,7株在反转录水平上表达。
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