论文部分内容阅读
钙离子调控的胞吐是神经细胞和内分泌细胞释放神经递质和激素的重要方式。在突触末梢中,突触囊泡被用于释放神经递质。在中枢神经系统中除了神经元以外,星形胶质细胞也可以释放递质。这些递质被称为“gliotransmitter(胶质递质)”,比如谷氨酸、D-丝氨酸和ATP。这些gliotransmitter的释放是可以被钙离子调控的。虽然已有大量研究表明星形胶质细胞可以行使从调节突触传递到特异地控制整体动物的行为等多种生物学功能,但是现在研究者们对于其囊泡分泌的基本过程了解的还不够。胶质细胞究竟是依靠哪种类型的囊泡进行递质分泌是一个基本的细胞生物学问题,这一问题现在还是没有确定的答案。
为了深入研究胶质细胞的囊泡融合和递质释放过程,本研究选择了培养的和急性分离的小鼠海马星形胶质细胞作为标本。结合内源囊泡蛋白的免疫组化、单色和双色全反射显微镜以及谷氨酸“sniffer”电流记录等实验技术,本研究得到了下面几个实验结果:
1.小囊泡和溶酶体共存于培养的和急性分离的星形胶质细胞中。大部分小囊泡同时特异表达synaptobrevin2和cellubrevin(它们都是与囊泡联合的膜蛋白(vesicle-associated membranes proteins))。使用荧光蛋白标记的synaptobrevin2可以追踪小囊泡的融合过程。溶酶体特异表达LAMP1(lysosome-associatedmembrane protein1,一种溶酶体的标记蛋白)。使用荧光蛋白标记的LAMP1可以追踪溶酶体的融合过程。
2.FM染料是一种理论上可以非选择性地标记所有发生融合-内吞过程的囊泡的染料。但是在星形胶质细胞中FM只能特异标记溶酶体,不能标记小囊泡。
3.小囊泡和溶酶体的融合都可以被胞内钙离子升高触发。小囊泡和溶酶体融合发生在星形胶质细胞的不同亚细胞位置。小囊泡融合事件的数量多于溶酶体融合事件,速度快于溶酶体融合事件。
4.谷氨酸转运体1(VGLUT1)只在小囊泡上表达,在溶酶体上没有表达。使用VGLUT的特异阻断剂台盼蓝或玫瑰红处理星形胶质细胞可以抑制刺激触发的谷氨酸释放。
5.使用一种Clostridial toxin(tetanus toxin)特异切断synaptobrevin2和cellubrevin可以显著性的抑制刺激触发的谷氨酸释放,同时溶酶体的形态和融合却没受到影响。
综合以上结果,本研究发现小囊泡和溶酶体对胶质细胞的钙调控囊泡分泌都有贡献,小囊泡和溶酶体有不同的融合动力学,并且证实了小囊泡是胶质细胞分泌谷氨酸所必需的。这一发现可能会对人们了解胶质细胞-神经元相互作用提供新的视角。