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目的MP可通过呼吸道进入人体,引起呼吸系统疾病以及严重的肺外并发症,作为引起20-30%社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia, CAP)的病原菌,其危害性已经越来越多地引起人们的注意。由于临床治疗中对大环内酯类抗生素的依赖性,国内近几年发现MP对大环内酯类耐药性呈急剧上升的趋势,有资料表明含有大环内酯类耐药突变的MP感染患儿后其临床表现一般较重、平均病程延长,本实验旨在研究MP耐药情况(包括耐药水平、耐药率和耐药位点)及耐药突变与临床表现的相关性。方法本实验的材料取自2013年3月-9月期间浙江大学医学院附属儿童医院呼吸科和检验科,包括140例MPP患者呼吸道标本(包括NPA、痰液标本)及112例MP DNA标本。1通过在多种不同的商品化液体、固体培养基及不同培养条件下培养MP标准株MP FH,确定最佳的培养基和培养条件,用于后续的MP临床株分离。2对临床MP呼吸道标本进行分离纯化培养后,通过微量稀释药敏法检测MP对常用的抗生素(包括大环内酯类抗生素、四环素类抗生素、喹诺酮类抗生素)的耐药浓度。3对MP DNA标本的23S rRNA V区进行测序,分析耐药率及耐药突变特点。4对MP感染患儿的临床资料进行统计,包括患者的性别、年龄、诊断、肺外并发症、胸部X线胸片的特点及治疗情况等,分析MP大环内酯耐药突变与临床症状的相关性。5统计学处理：采用SPSS16.0统计软件进行分析,数据以均数(x)±标准差(±s),两组比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1使用荧光定量试剂盒检测临床呼吸道标本,在140例呼吸道标本中,MP阳性占68例,阳性率为68/140*100%=48.6%；MP阳性呼吸道标本中分离纯化出13株MP,总分离培养阳性率为13/140*100%=9.3%。2最佳的培养条件为37℃5%CO2；商品化液体培养基中上海其昌达液体培养基较好；不添加美兰和醋酸铊固体培养基更有利于MP生长。3发生耐药突变的MP菌株对大环内酯类抗生素耐药,对四环素类抗生素和喹诺酮类抗生素敏感。4对112例MP DNA标本进行23SrRNA V区扩增后有105例扩增出正确条带,测序结果经过软件比对分析发现,在105例MP DNA标本中有22例发生了23SrRNA V区耐药突变,耐药位点总突变率为22/105*100%=21.0%。突变位点均为2063A->G。未发现其他已报道位点(包括2064、2067和2617位点)突变。522例发生耐药突变的IP DNA标本中有12例存在突变位点处部分突变。发现1例尚未报道过的2062G->A突变。6对MP突变组与未突变组在临床资料的统计分析发现,突变组在X线胸片影像学特征上与未突变组相比,更有可能表现为代表病情更严重的大片影。结论123S rRNA V区突变提高了MP菌株对大环内酯类抗生素耐药浓度,对四环素类和喹诺酮类抗生素耐药浓度改变不大。2MP大环内酯耐药突变可能导致患者胸部X线表现更为严重,基因突变组胸片表现表现以大片影为主,而基因未突变组表现以斑片影为主。