超临界CO2体系萃取胚芽油及酶转化亚油酸制备共轭亚油酸的研究

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共轭亚油酸(CLA)具有许多重要生理功能,作为一种功能性食品添加剂已经成为一种趋势。目前,具有生物活性的CLA的制备方法主要是由亚油酸(LA)酶转化的生物合成法。因为底物亚油酸微溶于水,并且合成的CLA较难从溶剂中分离纯化,限制了生物合成CLA的应用。本论文采用超临界CO2(SCCO2)流体对小麦胚芽油进行萃取,并通过固定化亚油酸异构酶在超临界CO2体系中催化胚芽油中亚油酸转化为共轭亚油酸,主要结果如下:在清楚了小麦胚芽中各组分含量的基础上,单因素和正交试验优化得到超临界CO2萃取小麦胚芽油的工业条件为压力30MPa、温度35℃、时间1.0h、流速0.5L/min,在此工艺条件下,小麦胚芽油的萃取率为8.68%;获得的小麦胚芽油中含有较高VE和较低的脂肪氧化酶活性,它们均能降低脂肪氧化速度,经过加速氧化后的POV为64.52mmol/kg,表明小麦胚芽油具有较好的脂肪氧化稳定性。亚油酸异构酶在超临界CO2体系固定材料与方法选择了海藻酸钙-包埋法;制备条件为海藻酸钠浓度3%,加酶量20%(v/v), CaCl2浓度3%,固定时间4h,所得固定化酶的酶活为38.72U/g和蛋白回收率为94.91%;底物浓度为70mg/ml具有较好酶活,最适温度为35℃,最适pH为6.0,固定化亚油酸异构酶具有较好的热稳定性;亚油酸异构酶的动力学参数为Km=15.30mg/ml, Vm=64.94μg/(min·ml),固定化亚油酸异构酶的动力学参数为Km=14.68mg/ml, Vm=45.66μg/(min·ml);循环重复3次时固定化亚油酸异构酶仍为30.57U/g。固定化亚油酸异构酶在SCCO2体系中具有较好的稳定性;单因素试验及响应面法对酶催化合成CLA的反应条件进行优化,得到的酶催化合成CLA的最佳反应条件为:底物LA浓度0.05g/ml,温度36℃,压力30MPa,时间1.5h,在此条件下得到的实际合成的CLA为60.58mg/g;重复反应3次时CLA保持较高的合成量。固定化亚油酸异构酶催化的小麦胚芽油浓度为0.10g/ml,固定化酶量为0.5g/ml,催化时间为60mmin时合成的CLA为18.43mg,酶具较好的重复性;固定化酶与小麦胚芽不同混合方式对小麦胚芽油的萃取率和合成CLA的影响显著,固定化酶所含的水在SCCO2状态下与小麦胚芽发生粘结现象,水分子包裹了小麦胚芽阻止了小麦胚芽油的SCCO2体系中溶解;固定化酶相对含水量为90%时,以上固下麦的混合方式的萃取率为8.43%,合成的CLA为2.73mg。
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