目的：　　考察穿心莲内酯铜绿假单胞菌 PAO1生物被膜（BF）形成过程的影响，并在分子水平动态检测药物与细菌群体感应系统的相关性，从分子水平探讨穿心莲内酯的抗菌机制，进一步开发和利用提供科学的实验依据和理论。　　方法：　　1、以穿心莲内酯作为对照品，采用高效液相色谱法制作穿心莲内酯实验品的控制质量药材。采用96孔板培养法，分别给予铜绿假单胞菌标准株、大肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准株和铜绿假单胞菌PAO1穿心莲内酯100μg/mL，10μg/mL，1μg/mL，0.1μg/mL，0.01μg/mL和0.001μg/mL后，在24h内每隔1h用酶标仪（A=420nm）检测96孔板培养液的吸光度并绘制生长曲线。　　2、用异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白A和碘化吡啶荧光染色，采用激光共聚焦显微镜（LSCM）观察10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL和0.01μg/mL穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜的形态和厚度的影响。　　3、采用实时荧光定量PCR检测100μg/mL、1μg/mL和0.01μg/mL穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1群体感应系统相关基因lasR/rhlR及pvdQ基因mRNA水平在24 h内动态表达的影响。　　结果：　　1、通过测试细菌24 h内的生长曲线，结果显示空白组和药物组的生长曲线无差异，说明穿心莲内酯无明显影响细菌的生长的作用；　　2、激光共聚焦显微镜（LSCM）结果显示，24h可观察到绿色和红色荧光信号零散，表明细菌刚刚开始聚集，多糖基质有微量的形成，生物被膜开始形成。48h时可见绿色荧光逐渐增强增多，红色信号开始有小团聚集，表示生物被膜已逐步增多。72h时红色信号大量聚集，绿色信号成片生成，结构致密，表示生物被膜已分化成熟。在药物作用下，随着时间的推移，药物对细菌的作用逐渐显现出来，这种抑制作用在0.1μg/ml剂量左右最为明显；随着时间和药物浓度的变化，给药后各组的生物被膜的厚度也在发生变化。在24 h时空白对照组生物被膜厚度最大；48h时生物被膜趋于稳定；48h后厚度稍微增加。空白组与10μg/mL组比较，24h时无显著性差异，但48h后表现出显著性差异；0.01μg/mL～1μg/mL剂量下，生物被膜几乎是一开始就表现出差异性，这表明高浓度的药物对细菌的作用有延迟效应。0.01μg/mL～1μg/mL的药物进入含菌体系中后很快就表现出差异性，随着时间的延长这种影响也越发明显。　　3、实时定量荧光PCR测定结果显示，在药物作用初期，穿心莲内酯均降低三段基因的表达，然后升高，提示可能这些基因在药物的刺激下表达量增多，在15h时到达峰值，然后逐步放缓。但是100μg/mL和0.01μg/mL剂量的穿心莲内酯对pvdQ基因的表达量的升高作用大于lasR和pvdQ基因，1μg/mL剂量反而对pvdQ基因起着一直抑制的作用。　　4、Matlab的拟合结果显示，在不同浓度的穿心莲内酯作用下，lasR、rhlR和pvdQ三段基因的相对表达量并无质的变化，pvdQ与lsaR/rhlR之间构成了一个反馈和负反馈调节系统。　　结论：　　穿心莲内酯能够影响铜绿假单胞菌PAO1生物被膜的形成，但是不能影响铜绿假单胞菌PAO1群体感应系统相关基因lasR/rhlR及pvdQ基因表达水平，穿心莲内酯抗菌机制与群体感应系统相关基因lasR/rhlR及pvdQ信号通路无关，其抗菌作用可能是通过其他信号通路而实现的。穿心莲内酯的抗菌机制还有待进一步研究。