研究背景:近年来随着科学技术的迅猛发展和医疗技术水平的不断提高，许多新的医疗技术手段和方法在临床上得到了广泛应用，从冠脉内单纯球囊扩张到药物沈脱支架的应用；从体外循环和停跳冠脉搭桥到微创无停跳搭桥；从单纯心脏骤停后的心脏复苏到心肺脑复苏；从单一的肾脏移植到肝移植和胰肾联合移植。这些进步大大提高了临床对疾病的治疗效果和患者的预后，但同时也伴随出现了大量器官缺血再灌注损伤(Ischemiareperfusioninjury，I/R)的病理生理过程，常常导致治疗效果不尽如人意甚至治疗失败。 心脏是对缺血缺氧耐受性较差的器官之一，是发生缺血再灌注损伤的最常见的器官，尤其是近年来冠脉内介入技术的广泛开展和心脏搭桥手术的不断进步使心脏缺血再灌注损伤的发生更为普遍。因此，如何减少缺血再灌注损伤的发生和减轻其造成的心脏损害是目前基础研究和临床实践的重要课题。 氧化应激是缺血再灌注损伤发生时的重要机制之一，常导致自由基增加、细胞膜性结构破坏、线粒体电位降低等，因此如何预防再灌注损伤时的氧化应激具有重要意义。轻度心肌缺血和再灌注后凋亡是心肌细胞主要的病理改变，而凋亡基因Bcl—2家族在凋亡的发生发展过程中居于核心地位。PPAR—γ激动剂罗格列酮(Rosiglitazone，ROS)是最早用于治疗糖尿病的胰岛素增敏剂，近期研究证明其也具有改善脑、肾和胰腺等器官缺血再灌注损伤的作用。 因此，观察罗格列酮对心肌缺血再灌注损伤的影响并探讨其可能的机制，为临床心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的思路是非常必要的。 目的: 本研究旨在通过体外培养大鼠原代心肌细胞，模拟缺血再灌注损伤条件建立缺氧/复氧模型，观察缺氧/复氧对大鼠心肌细胞氧化应激、细胞活性及凋亡的影响和罗格列酮的干预作用；观察缺氧/复氧对大鼠心肌细胞Bcl—2基因和Bax基因的影响和罗格列酮的调控作用； 通过建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型观察缺血再灌注损伤时大鼠心脏左室压力、冠脉流量和心率的变化以及罗格列酮的干预作用；从病理组织学上分析罗格列酮对心肌组织再灌注损伤的影响；观察再灌注损伤时心肌Bcl—2和Bax的表达以及罗格列酮的调控作用。 通过细胞和组织水平的研究，探讨罗格列酮是否能改善心脏缺血再灌注损伤及其具体机制，为心脏缺血再灌注损伤的防治提供新的思路和策略，并为PPAR—γ激动剂在防治缺血再灌注损伤的临床运用提供新的理论依据。 方法: 第一部分： 观察缺氧/复氧对原代心肌细胞MDA(TBA法)、SOD(黄嘌呤氧化酶法)和LDH(2，4-二硝基苯肼法)的影响以及罗格列酮的干预作用；观察缺氧/复氧对心肌细胞活力和凋亡率的影响以及罗格列酮的干预作用；使用投射电镜观察缺氧/复氧对心肌细胞超微结构的影响以及罗格列酮的干预作用。 第二部分： 利用Real—timePCR(实时荧光定量PCR)技术观察缺氧/复氧对心肌细胞抗凋亡基因Bcl—2mRNA和促凋亡基因BaxmRNA水平的影响以及罗格列酮的干预作用；利用Westernblot技术观察缺氧/复氧对心肌细胞Bcl—2蛋白和Bax蛋白的变化以及罗格列酮的干预作用。 第三部分： 建立大鼠心脏Langendrof灌流模型，观察I/R损伤对左心室压力变化的影响以及罗格列酮的干预作用；观察I./R损伤对大鼠心脏氧化应激的影响和组织学变化以及罗格列酮的干预作用；利用Real—timePCR(实时荧光定量PCR)技术观察I/R损伤在器官水平上对心肌组织抗凋亡基因Bcl—2mRNA和促凋亡基因BaxmRNA水平和Bcl—2蛋白、Bax蛋白表达的影响已经罗格列酮的干预作用。 结果: 第一部分： DMSO—treated(I/R)组MDA和LDH水平明显高于DMSO—treated组(P<0.05)，而SOD水平和细胞活力较DMSO—treated组降低(P<0.05)；ROS—treated(20umol/L)(I/R)组和ROS—treated(80umol/L)(I/R)组MDA和LDH水平较DMSO—treated(I/R)组显著降低，而SOD水平和细胞活力升高(P<0.05)； DMSO—treated(I/R)组细胞凋亡率显著高于DMSO—treated组，而ROS—treated(20umol/L)(I/R)组和ROS—treated(80umol/L)(I/R)组细胞凋亡率较DMSO—treated(I/R)组降低(P<0.05)；以上指标ROS—treated(20umol/L)(I/R)组和ROS—treated(80umol/L)(I/R)组也存在差异(P<0.05)。ROS可以减轻心肌细胞凋亡小体的产生。 第二部分： Real—timeRT—PCR结果示：DMSO—treated(I/R)组Bcl—2mRNA的表达明显低于DMSO—treated组和ROS—treated(20umol/L)组，而BaxmRNA的表达显著高于该两组(P<0.05)；ROS—treated(80umol/L)(I/R)组和DMSO—treated(I/R)组比较，Bcl—2mRNA水平增高而BaxmRNA水平降低(P<0.05)； Westernblot结果显示：DMSO—treated(I/R)组Bcl—的蛋白水平明显低于DMSO—treated组和ROS—treated(20umol/L)组，而Bax蛋白水平显著高于该两组(P<0.05)；ROS—treated(80umol/L)(I/R)组和DMSO—treated(I/R)组比较，Bcl—2蛋白水平增高而Bax蛋白水平降低(P<0.05)； 第三部分： 通过建立大鼠心脏Langendorff灌流模型，发现I/R组CF、HR和LVDP、+dp/dt较Sham组显著降低，而LVEDP和—dp/dt较Sham组显著增高(P＜0.05)；(ROS—treated)(3mg/kg)(I/R)组和I/R组相比CF、HR和LVDP、+dp/dt显著增高，而LVEDP和—dp/dt显著降低(P＜0.05)；ROS可以改善I/R损伤引起的MDA、LDH升高和SOD降低(P＜0.05)；ROS可以改善缺血再灌注损伤引起的心肌组织学改变。 I/R组较Sham组Bcl—2mRNA水平降低而BaxmRNA水平增高(P＜0.05)；(ROS—treated)(3mg/kg)(I/R)组和I/R组相比，Bcl—2mRNA和Bcl—2蛋白水平升高而BaxmRNA和蛋白水平降低(P＜0.05)。 结论: 1)缺血再灌注损伤无论在细胞水平还是在器官水平均可引起心肌组织氧化应激反应，而PPAR—γ激动剂罗格列酮具有减轻氧化应激损伤的作用。 2)罗格列酮可以改善缺血再灌注损伤导致的心室冠脉流量降低和心率下降，改善心室的收缩和舒张功能。 3)缺血再灌注损伤可以导致心肌细胞凋亡率增加，而罗格列酮可以降低细胞凋亡率，其机制可能是罗格列酮上调了抗凋亡基因Bcl—2的表达和下调了促凋亡基因Bax的表达。