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本文合成了两种针对目标检测物五氯酚的半抗原(H1和H2)。其中半抗原H2采用对羟基四氯氢醌作为合成反应起始物质制备半抗原。该半抗原合成设计方案在国内外五氯苯酚免疫研究中鲜有相关报道,并且在本实验中取得了良好的实验结果。两种半抗原均采用活性酯法偶联牛血清白蛋白(BSA)制备免疫原(PCP1-BSA和PCP2-BSA);并分别免疫动物取得了抗血清(R1和R2);抗血清R1间接竞争ELISA检测效价为1∶8.0×104,抗血清R2间接竞争ELISA检测效价为1∶1.6×104。
建立了抗血清R1和R2的五氯酚间接竞争ELISA标准抑制曲线,其中抗血清R2取得了较好的特异性和灵敏度,抑制中浓度为IC50=4.2ng·mL-1,最低检测限IC10=0.068ng·mL-1,标准曲线的线形范围为0.19~93ng·mL-1。
抗体R2与结构类似物的交叉反应率为对五氯硝基苯:2.47%;六氯苯:1.79%;2,3,4,6-四氯苯酚:2.22%;其它氯苯类物质如2,4-D、PCBs等均<0.16%;本文还研究了pH值、离子强度、有机溶剂含量等因素对间接竞争ELISA检测的影响。初步建立了环境水体如井水、河水、湖水等水体水样中五氯酚间接竞争ELISA检测方法,并与气相色谱国标检测方法进行了比较,二者检测结果无显著性差异。如果进一步研制开发试剂盒,可适用于现场大量样品的快速检测。