蛋白酶体对维持细胞内蛋白质内稳态具有十分重要的作用,蛋白质内稳态混乱以及蛋白质功能异常经常会引起很多疾病。REGγ作为一种蛋白酶体激活因子,已经被报道在很多信号通路以及生理病理过程中扮演重要的角色,因此,筛选REG y和20S蛋白酶体相互作用的抑制剂具有非常重要的研究意义和潜在的应用价值。前期的机制研究中,我们发现REG γ行使生物学功能是通过与20S蛋白酶体α 7亚基结合实现的。本论文中,我们首先利用荧光素酶蛋白质片段互补技术,构建并挑选出一套可以便捷地监测细胞中REG γ与α 7相互作用情况的系统,即lucN(416-linker1)-REGγ和 α7-lucC(linker1-394),但免疫荧光结果显示:lucN-REGγ融合蛋白主要定位于细胞核中,而lucC-α 7融合蛋白则主要定位于细胞质中。为了进一步提高该系统的灵敏度以及排除内源REGγ的干扰,我们对该监测系统进行了优化:将REG γ的核定位序列中第85位和86位的赖氨酸(K)突变为谷氨酰胺(Q),突变后的lucN-REGγ(K85QK86Q)主要定位于细胞质中,与lucC-α 7融合蛋白共定位,从而使荧光素酶活性也大大增强。最后,我们发现缺失活性环的REG γ突变体REG γ(NL)能显著抑制检测体系中荧光素酶活性,而后一系列实验表明:REG y(NL)可能通过竞争性结合REG γ而抑制REG γ与α 7的相互作用,两者实验结果一致,这也从侧面反映出该筛选系统的可行性。另外,REG γ发挥其生物学功能主要以形成七聚体形式,该论文中,我们也初步将所设计的荧光素酶N端和C端片段系统应用到此方面的研究中,期望建立一套可以筛选特异性抑制REG γ七聚体形成的筛选系统。这两个系统的建立为有效筛选REGγ特异性抑制剂奠定了扎实的前期理论基础。