猫血巴尔通氏体16S rRNA基因序列分析与流行病学初步研究

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猫血巴尔通氏体(Haemobartonella felis)是引起猫发生传染性贫血的病原之一,在过去的分类体系中,被归属于立克次氏体目(Rickettsiales)、无形体科(Anaplasmataceae)。近来的许多研究指出,“血巴尔通氏体属”和“附红细胞体属”病原在分类上应并归入支原体目(Mycoplasmatales)、支原体属(Mycoplasma),是一类“血营养性支原体(hemotrophic mycoplasmas)”,或称为“血营养菌(haemotrophic bacteria)”或“血原体(hemoplasmas)”。 本实验以猫血巴尔通氏体为研究对象,对猫小型血巴尔通氏体近乎全长的16SrRNA基因进行了PCR扩增及序列分析,对广州地区的猫群感染血巴尔通氏体的情况进行了分子流行病学调查。另外,通过动物实验证实了猫小型血巴尔通氏体不能够容易地通过血液传播的方式感染健康犬或经脾脏摘除的犬。 挑选经姬姆萨染色镜检和PCR检测后,证实为猫小型血巴尔通氏体阳性感染的猫血液DNA样品,用能扩增大多数真细菌16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,扩增产物经克隆、测序后,获得了大小为1456bp核苷酸序列(在GenBankTM登陆号为AM745338)。经过序列比对和系统进化分析,发现该序列与Willi公布的猫血巴尔通氏体(DQ825442)的16S rRNA基因序列相似性达99.7%,证实测得的序列为猫小型血巴尔通氏体(Haemobartonella felis)的16S rRNA基因序列,按照新的分类体系应称之为“Candidatus Mycoplasma haemominumm”。使用PHYLIP软件(V3.6版),选择肺炎支原体(Mycoplasma pneumonMe)的16S rRNA基因序列为外群,构建系统进化发生树。结果显示,不同动物来源的的血营养菌在系统进化发生上都为肺炎支原体一簇的病原,没有明显的出现“血巴尔通氏体属”和“附红细胞体属”这两个进化支。系统进化分析结果支持Neimark(2001)和Messick(2004)提出的观点,即将“血巴尔通氏体属”和“附红细胞体属”的病原合归为同一类病原,并称为“血营养菌(hemotrophic bacteria)”或“血原体(hemoplasmas)”的观点。 采集广州地区188只健康猫或发病猫的血液样品,抽提全血基因组DNA。参照Jensen(2001)报道的引物及PCR方法(使用该方法能够对猫体内感染大型血巴尔通氏体和小型血巴尔通氏体的情况进行鉴别区分),PCR扩增产物经6%的变性凝胶电泳后,发现123只猫感染血巴尔通氏体,其感染率为65.4%。其中1只猫单独感染大型血巴尔通氏体,感染率为0.5%;122只猫单独感染小型血巴尔通氏体,感染率为64.9%。没有检测出感染“Candidatus Mycoplasma turicensi”的猫,也没有发现同时混合感染两种或三种血营养菌的猫。以经姬姆萨染色镜检和PCR检测作为感染的评价方法,从确诊为单独感染猫小型血巴尔通氏体的发病猫抽取血液,接种到无特定病原体的健康犬(实验组1)、经脾切除的犬(实验组2)及猫(对照组)。结果健康犬和脾切除的犬并没有获得感染,对照组的猫获得了长达21天感染。实验结果初步证实,猫小型血巴尔通氏体具有较强宿主特异性,通过血液接种的方式可以在本动物之间传播,但不能容易地通过输血传播的方式传播给健康犬或经脾切除的犬。
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