2种龙胆科蒙药及其混淆品的化学轮廓和保肝作用比较及质量评价体系研究

来源 :内蒙古民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chc1102
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目的:采用高效液相色谱法和药理实验研究比较肋柱花及扁蕾、花锚、紫花地丁和苦地丁的化学轮廓和保肝作用的差异。并对扁蕾和花锚按《中国药典》(2020版)要求补充其常规检查项目和理化鉴别,同时填补建立扁蕾和花锚的多指标质量评价体系。为肋柱花、花锚和扁蕾的混淆使用及用异科植物紫花地丁和苦地丁替代使用是否合理的初步依据。方法:采用高效液相色谱法以肋柱花化学轮廓为对照对象,优化其色谱条件,在经优化得到的最佳色谱条件下(色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-超纯水(B),梯度洗脱,B:0~15 min,85%~75%;15~30 min,75%~55%;30~35 min,55%~85%;35~40 min,85%~85%。体积流量为1.0 m L/min,柱温30℃,进样量10μL,检测波长275nm),进样、扫描、测定,并分析肋柱花及扁蕾、花锚、紫花地丁和苦地丁的整体化学信息及差异性。采用药理实验手段以肋柱花及扁蕾,花锚,紫花地丁和苦地丁等5个药材为给药组,结合正常组,模型组,阳性组检测各组实验小鼠血清中AST、ALT指标和HE染色观察肝组织病理病因,比较保肝作用的差异。按照现行《中国药典》(2020版)杂质检查项下内容要求,补充了扁蕾和花锚的重金属检查、砷盐检查、水分测定、灰分测定及浸出物检查等项目。运用化学法对扁蕾和花锚中黄酮类化合物进行化学鉴别,利用TLC法对扁蕾和花锚中分别是1,8-二羟基-4,6-二甲氧基双苯吡酮,齐墩果酸和熊果酸进行TLC鉴别。采用高效液相色谱法对不同批次扁蕾和花锚进行含量测定,HPLC条件(色谱柱、流动相、洗脱浓度和时间、体积流量及进样量等同上),柱温40℃,检测波长237nm。结果:以肋柱花化学轮廓为对照对象,优化其色谱条件,在经优化得到的最佳色谱条件下,进样、扫描、测定,并分析得到10个批次肋柱花中选取了9个共有峰作为特征指纹峰,创建了肋柱花的对照指纹图谱。并采用标准对照法对其共有峰进行识别,确定了其中7个共有峰对应的化合物,分别獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、异牡荊苷、当药黄素、当药醇苷、hypolaetin-7-O-β-D-glucoside和swertianolin。为了合理比较肋柱花与花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁的化学轮廓,本法首先在相同色谱条件下,获得花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁的化学轮廓色谱图。然后采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版本)》进行相似度分析。发现肋柱花与同属植物扁蕾和花锚的相似度较高,并且其主要化学成分与肋柱花对照指纹图谱中共有峰重叠,而与异属植物紫花地丁和苦地丁的相似度较低,而且与肋柱花对照指纹图谱中共有峰虽有2个重叠峰,但其峰面积相差极大。药理实验结果中可以发现模型组各小鼠血清ALT及AST指标明显升高,与空白组比较有显著差异(P<0.01),表明模型建立成功。阳性对照组各小鼠血清ALT及AST指标明显降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。肋柱花水提低剂量组、扁蕾水提剂量组、花锚水提剂量组、紫花地丁水提剂量组、苦地丁水提剂量组的ALT及AST均显著降低,与模型组比较有显著差异(P<0.05);HE染色观察肝组织病理病因结果表明模型组跟空白组相比小鼠肝小叶结构严重破坏,可见大量细胞点状坏死,存在明显的肝细胞变性、碎屑样坏死,汇管区周边的肝细胞可见明显的嗜酸性变和气球样变,炎症明显,出现大量炎症细胞浸润。给药组跟模型组比较肝细胞整齐较规则,可见少量细胞点状坏死和炎症细胞浸润,与模型组比较,炎症程度明显减轻。TLC鉴别结果得知1,8-二羟基-3,7-二甲氧基双苯吡酮以石油醚-丙酮-甲酸(5:1:0.2)为展开剂,齐墩果酸与熊果酸以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:2:0.3)为展开剂,在实验优化的薄层色谱条件下,供试液与1,8-二羟基-3,7-二甲氧基双苯吡酮、齐墩果酸和熊果酸对照品Rf值相同斑点存在,并其Rf值合理、斑点清晰、重现性好。一般检查结果可以看出,12批花锚与16批扁蕾中重金属、砷盐、水分均符合中国药典标准。从灰分测定结果看,样品(HB04、HB05、HB09和HB13/XH01、XH02、XH05和XH11)中灰分和酸不溶灰分均较高,原因有可能是药材采集后加工处理不合理,没能处理掉部分泥土、砂粒等。12批花锚中水溶性浸出物平均含量为24.22%,醇溶性浸出平均含量为24.23%。16批扁蕾中水溶性浸出物平均含量为21.5%,醇溶性浸出平均含量为21.08%。在选用的实验色谱条件下花锚中的当药醇苷跟木樨草素浓度范围内校准曲线表现出良好的线性关系。平均回收率分别为96.54%和98.45%,RSD分别为0.48%和1.04%。在选用的实验色谱条件下扁蕾中的龙胆苦苷跟当药醇苷浓度范围内校准曲线表现出良好的线性关系。平均回收率分别为98.48%和99.18%,RSD分别为0.92%和0.49%。结论:通过应用所建立的肋柱花对照指纹图谱比较了肋柱花与同属植物扁蕾、花锚和异属植物紫花地丁、苦地丁的化学轮廓。并按照“等量不同强度”法比较肋柱花及扁蕾、花锚、紫花地丁和苦地丁的保肝作用。实验结果证明所建立的肋柱花对照指纹图谱和“等量不同强度”法对肋柱花能否被扁蕾、花锚、紫花地丁和苦地丁替代使用的评判具有一定的指导意义。另外,通过本文的实验研究,创建了扁蕾、和花锚等2种药材的多指标质量评价体系,其方法简便、快速、准确,可为评价2种药材质量提供可靠依据。
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