论文部分内容阅读
猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,我国将其列为一类动物疫病。猪瘟病毒结构蛋白Erns、E2蛋白能够产生特异性中和抗体,二者都与免疫保护相关,NS3蛋白亦能诱导抗体,均被用于疫苗研究。在区别感染和免疫动物(DIVA)猪瘟疫苗研究中,基于人腺病毒5型(HAd V-5)载体的重组活病毒疫苗已经取得良好的免疫保护水平,单独表达CSFV E2蛋白的重组腺病毒(r Ad V-E2)能够给试验猪提供免疫保护,但保护效果不够稳定。研究中常采用许多方法优化r Ad V-E2的免疫效果,比如:共表达CSFV E0和E2蛋白;或适当修饰载体,嵌入甲病毒复制子以增强腺病毒的递呈效率;或结合一些具有佐剂效应的细胞因子等。本研究获得了以下结果:(1)首次将假结核耶尔森菌的侵袭素C端(Inv C)引入猪瘟病毒腺病毒载体疫苗研究中,利用腺病毒表达载体构建了共表达猪瘟病毒E2基因和耶尔森菌侵袭素基因C端重组腺病毒疫苗(r Ad V-E2-Inv C)。本动物免疫接种攻毒试验结果表明,免疫猪能够完全抵抗致死剂量CSFV石门株的攻击。说明Inv C能够更好地发挥佐剂免疫增强效应,诱导更高的特异性抗体水平和保护水平,r Ad V-E2-Inv C可以作为猪瘟腺病毒活载体疫苗候选株。(2)将Flt3配体引入猪瘟病毒腺病毒载体疫苗研究中,利用腺病毒表达载体构建了共表达CSFV E2蛋白和FL的腺病毒载体疫苗(r Ad V-E2-FL),旨在通过FL的佐剂效应提高r Ad V-E2疫苗免疫效果。但本动物免疫接种攻毒试验结果表明,r Ad V-E2-FL组试验猪的CSFV特异性体液免疫和细胞免疫水平以及攻毒后的保护水平均与r Ad V-E2免疫组的无明显差异(p>0.05)。(3)利用腺病毒表达载体构建了共表达猪瘟病毒E0、E2基因和耶尔森菌侵袭素基因C端重组腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-Inv C)、共表达猪瘟病毒E0、E2和猪IL2基因重组腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-IL2)和共表达猪瘟病毒E0、E2和NS3基因的重组腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-NS3)3种疫苗,并且以口蹄疫病毒2A蛋白连接3个蛋白。试验结果表明,口蹄疫病毒2A能发挥其自我剪切功能;重组疫苗免疫家兔后6周,能完全保护猪瘟兔化弱毒的攻击。综上所述,本研究利用腺病毒载体构建了共表达CSFV E2基因和耶尔森菌侵袭素基因C端重组疫苗(r Ad V-E2-Inv C),本动物免疫接种攻毒试验结果表明,其能诱导良好的特异性抗体水平和坚固的免疫保护水平,可以作为猪瘟新型疫苗候选株。在此基础上,以FMDV 2A蛋白连接多个基因,进一步构建了r Ad V-E0-2A-E2-2A-Inv C、r Ad V-E0-2A-E2-2A-IL2和r Ad V-E0-2A-E2-2A-NS3 3个重组疫苗,家兔免疫接种攻毒试验结果表明,这3种疫苗均能完全保护猪瘟兔化弱毒的攻击,可深入的进行疫苗免疫保护试验。