【摘 要】
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【目的】探讨人类有机阴离子转运多肽超家族成员OATP-E mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达;建立荧光定量RT-PCR检测肿瘤细胞OATP-E基因
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【目的】探讨人类有机阴离子转运多肽超家族成员OATP-E mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达;建立荧光定量RT-PCR检测肿瘤细胞OATP-E基因表达的方法并绘制出外标准曲线,为基础研究、临床治疗和药物筛选提供针对人类有机阴离子转运多肽超家族成员OATP-E方面研究的有效手段。 【材料与方法】 1.细胞培养:以含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基常规培养乳腺癌细胞株MCF-7和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR,传代待其生长稳定后分别提取细胞总RNA待用。 2.细胞总RNA的提取:用Trizol试剂分别提取乳腺癌细胞株MCF-7和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的细胞总RNA。 3.RT-PCR反应:以所提取的乳腺癌细胞株MCF-7的细胞总RNA为原料,逆转录反应获得编码人类有机阴离子转运多肽超家族成员OATP-E的cDNA并进行普通PCR扩增。 4.构建克隆载体pGEM-OATP-E标准重组质粒:提取并纯化PCR产物,与pGEM-T Easy Vector质粒载体相连接,构建克隆载体pGEM-OATP-E重组质粒并转化大肠杆菌菌株JM109感受态细胞。 5.外标准曲线的建立:采用蓝白斑染色方法筛选并提取pGEM-OATP-E重组质粒,并将该pGEM-OATP-E重组质粒定量后作为标准品,绘制实时荧光定量RT-PCR方法检测OATP-E mRNA的外标准曲线。 6.采用本实验建立的实时荧光定量RT-PCR方法及其外标准曲线检测OATP-E mRNA在对阿霉素耐药的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表
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