论文部分内容阅读
第一部分 肝特异性抗原的同种异体免疫原性 肝脏移植和肝细胞移植已经成为一些终末期肝病的有效治疗手段,因此,了解肝细胞的免疫原性,以改善移植肝或移植肝细胞的生存、减少排斥反应的发生,就显得十分必要。尽管对MHC抗原已经进行了大量的研究,但并没有完全解决排斥反应和其它移植后肝病等困扰肝移植的问题。一方面,肝移植对MHC配型的要求程度不高,一般无需供受体MHC配合,免疫治疗后移植肝和受体都可能长期存活。另一方面,一些有关移植肝存活时间和HLA配型的研究结果表明,有些病例即使MHC多个位点配合,反而易导致移植肝失活和排斥反应的发生,表明HLA配合程度对肝移植可能存在双重作用。至今人们尚未对上述现象作出满意的解释,而且多数研究只局限在MHC抗原本身并存有争议。这是不是提示在MHC抗原之外,存在着其它的抗原系统参与肝移植的免疫反应、决定移植后效果? 在每一种组织或器官中,显然存在着相对于其他组织或器官具有特殊功能的细胞,这些细胞表达特定的蛋白以适应这种特殊功能的需要。虽然有些蛋白质是普遍表达的,但不同种类细胞上的表达水平并不一样,从而形成一个独特的抗原系统,称之为组织特异性抗原。已有研究表明,组织特异性抗原如皮肤、血管内皮细胞及肾特异性抗原在器官移植中发挥重要作用,但其机制还远未清楚。肝特异性抗原(LSA)是肝细胞膜上和胞浆内特有表达蛋白,由非MHC基因编码,据报道同种肝移植模型受者血清中均可检测到这种抗原,但其作用还不清楚,而且其同种异体免疫原性的研究未见报道。因此,本研究通过不同的免疫途径,探讨LSA能否引起同种异体免疫反应,是否具有同种异体免疫原性,并对其机制做了初步探讨。 浙江大学博上学位论文 材料与方法 30只 Lew大鼠随机分为 5组,作为 F344大鼠 LSA的免疫受体:*)假手术对照组(I组):一次性门静脉或胸腺注射 0.Zml PBS,两种方法的各项实验参数无明显差异;(2)足垫兔疫组(11组):足垫注射含1。g用相同体积弗氏完全佐剂乳化的LSA,一周后足垫注射含M 用相同体积弗氏不完全佐剂乳化的LSA,每周1次,连续3次;(3)门静脉兔疫组(Ill组):一次门静脉注射10。g (02mI)匕A;饲)胸腺免疫组(W组):一次胸腺内注射10。g(02ml)uA,每叶sing;(5)腹肿注射环磷酚胺组(V组):腹腔注射100mg八g环磷酚胺,作为诱导淋巳细胞凋亡的阳性对照。川油合淋巴细胞培养、混合淋巴细胞肝细胞培养、Western 印记、DNA凝胶电泳分析及1”UNEL等检测手段,对外周及中枢淋巴器官的功能进行分析,以确定处理后机体的免疫状态。 结 果 与1组柏比,LSA免疫后7大,11、Ill、IV组肌C的OD值略有降低,但无统计学差异(P>0.05),V组MI厂的OD值显昔降低(P(.of);与1组相比,LSA免疫后7天*、IIL W组MLHC的OD值均有显著降低(/0.05),但11、111、w组仙HC的OD值尚米降低到V组的水平(尸<0.01);各组乙醇固定的脾细胞DNA凝胜山泳分析表明,同V组相似,LSA u疫后7大,11、IV组均显示山明显的梯状条带,表明有凋亡细胞的存在;流式细胞仪DNA {A体分析结果显示,I组未见凋亡细胞,而11、Ill*V组及V组均山现了不同程度的凋亡细胞;除I组外,各实验组均出现明显的Caspase-3表达,且各组间的表达存在明显差异,V组的农达最高,11、w组次之,HI组较弱;此外,各实验组的胸腺TUNEL结果分别出现了程度不同的凋亡细胞。 讨 论 本实验的 MLC和 MLllC结果表明,经体内 LSA免疫后 Lew人鼠的淋巴细胞,并未丧大对同种MHC抗原的免疫应答能力,表明LSA诱导的低免疫应答状态是抗原特异性的,LSA免疫井不能改变针对MuC抗原的反应。 各实验组Caspase-3的活性均增加,结合脾细胞的DNA fA体和凝胶电泳分析以及胸腺’l”UNEL结果,表明LSA诱导的低免疫应答是抗原特异性淋巳细胞凋亡的结果。 2 浙江人学博上学位论文 尽管LSA具有器官特异性,但由于其可能的多态性,使得MllC-抗原肽所形成复合物的空间构象、叱荷性质及分布不尽相同,从而可以激活同种异体淋巴细胞,并通过门脉和胸腺耐受机制及Caspase途径诱导出抗原特异性淋巴细胞凋亡,符合大剂量激活耐受机制。 本研究的结果不仅显示LSA具有同种异体免疫原性,且通过LSA预处理能减轻受体对供体肝细胞的免疫反应,为LSA参与同种异体的免疫反应提供了实验依据,这可能为诱导同种肝移植免疫抑制开拓新的途径。 结 论1.l石A凤有同种异体抡疫原性,足一种重要的移植抗原。2.LSA不但能引起同种异体免疫反应,且大剂量或反复小剂量免疫可诱导出受体抗原特异性淋 ?