第一部分 肝特异性抗原的同种异体免疫原性 肝脏移植和肝细胞移植已经成为一些终末期肝病的有效治疗手段，因此，了解肝细胞的免疫原性，以改善移植肝或移植肝细胞的生存、减少排斥反应的发生，就显得十分必要。尽管对MHC抗原已经进行了大量的研究，但并没有完全解决排斥反应和其它移植后肝病等困扰肝移植的问题。一方面，肝移植对MHC配型的要求程度不高，一般无需供受体MHC配合，免疫治疗后移植肝和受体都可能长期存活。另一方面，一些有关移植肝存活时间和HLA配型的研究结果表明，有些病例即使MHC多个位点配合，反而易导致移植肝失活和排斥反应的发生，表明HLA配合程度对肝移植可能存在双重作用。至今人们尚未对上述现象作出满意的解释，而且多数研究只局限在MHC抗原本身并存有争议。这是不是提示在MHC抗原之外，存在着其它的抗原系统参与肝移植的免疫反应、决定移植后效果? 在每一种组织或器官中，显然存在着相对于其他组织或器官具有特殊功能的细胞，这些细胞表达特定的蛋白以适应这种特殊功能的需要。虽然有些蛋白质是普遍表达的，但不同种类细胞上的表达水平并不一样，从而形成一个独特的抗原系统，称之为组织特异性抗原。已有研究表明，组织特异性抗原如皮肤、血管内皮细胞及肾特异性抗原在器官移植中发挥重要作用，但其机制还远未清楚。肝特异性抗原(LSA)是肝细胞膜上和胞浆内特有表达蛋白，由非MHC基因编码，据报道同种肝移植模型受者血清中均可检测到这种抗原，但其作用还不清楚，而且其同种异体免疫原性的研究未见报道。因此，本研究通过不同的免疫途径，探讨LSA能否引起同种异体免疫反应，是否具有同种异体免疫原性，并对其机制做了初步探讨。 浙江大学博上学位论文 材料与方法 30只 Lew大鼠随机分为 5组，作为 F344大鼠 LSA的免疫受体：＊）假手术对照组（I组）：一次性门静脉或胸腺注射 0．Zml PBS，两种方法的各项实验参数无明显差异；（2）足垫兔疫组（11组）：足垫注射含1。g用相同体积弗氏完全佐剂乳化的LSA，一周后足垫注射含M 用相同体积弗氏不完全佐剂乳化的LSA，每周1次，连续3次；（3）门静脉兔疫组（Ill组）：一次门静脉注射10。g （02mI）匕A；饲）胸腺免疫组（W组）：一次胸腺内注射10。g（02ml）uA，每叶sing；（5）腹肿注射环磷酚胺组（V组）：腹腔注射100mg八g环磷酚胺，作为诱导淋巳细胞凋亡的阳性对照。川油合淋巴细胞培养、混合淋巴细胞肝细胞培养、Western 印记、DNA凝胶电泳分析及1”UNEL等检测手段，对外周及中枢淋巴器官的功能进行分析，以确定处理后机体的免疫状态。 结 果 与1组柏比，LSA免疫后7大，11、Ill、IV组肌C的OD值略有降低，但无统计学差异（P＞0．05），V组MI厂的OD值显昔降低（P（．of）；与1组相比，LSA免疫后7天＊、IIL W组MLHC的OD值均有显著降低（／0．05），但11、111、w组仙HC的OD值尚米降低到V组的水平（尸＜0．01）；各组乙醇固定的脾细胞DNA凝胜山泳分析表明，同V组相似，LSA u疫后7大，11、IV组均显示山明显的梯状条带，表明有凋亡细胞的存在；流式细胞仪DNA ｛A体分析结果显示，I组未见凋亡细胞，而11、Ill＊V组及V组均山现了不同程度的凋亡细胞；除I组外，各实验组均出现明显的Caspase－3表达，且各组间的表达存在明显差异，V组的农达最高，11、w组次之，HI组较弱；此外，各实验组的胸腺TUNEL结果分别出现了程度不同的凋亡细胞。 讨 论 本实验的 MLC和 MLllC结果表明，经体内 LSA免疫后 Lew人鼠的淋巴细胞，并未丧大对同种MHC抗原的免疫应答能力，表明LSA诱导的低免疫应答状态是抗原特异性的，LSA免疫井不能改变针对MuC抗原的反应。 各实验组Caspase－3的活性均增加，结合脾细胞的DNA fA体和凝胶电泳分析以及胸腺’l”UNEL结果，表明LSA诱导的低免疫应答是抗原特异性淋巳细胞凋亡的结果。 2 浙江人学博上学位论文 尽管LSA具有器官特异性，但由于其可能的多态性，使得MllC－抗原肽所形成复合物的空间构象、叱荷性质及分布不尽相同，从而可以激活同种异体淋巴细胞，并通过门脉和胸腺耐受机制及Caspase途径诱导出抗原特异性淋巴细胞凋亡，符合大剂量激活耐受机制。 本研究的结果不仅显示LSA具有同种异体免疫原性，且通过LSA预处理能减轻受体对供体肝细胞的免疫反应，为LSA参与同种异体的免疫反应提供了实验依据，这可能为诱导同种肝移植免疫抑制开拓新的途径。 结 论1．l石A凤有同种异体抡疫原性，足一种重要的移植抗原。2．LSA不但能引起同种异体免疫反应，且大剂量或反复小剂量免疫可诱导出受体抗原特异性淋 ?