肿瘤反应性对TGF-β不敏感的CTL细胞对异种移植裸鼠前列腺癌治疗作用的研究

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目的:利用裸小鼠建立人前列腺癌肿瘤动物模型,再利用肿瘤反应性TGF-β不敏感的CTL进行治疗试验;收获裸鼠移植瘤块,利用其满足相关实验研究需要,如TGF-β水平测定、肿瘤相关抗原的提取等;将裸鼠体内过继培养所得瘤块进行原代培养并与直接组织块培养方法进行对比,探索更好的细胞原代培养方法。方法:将自前列腺癌根治手术中获得的前列腺癌组织标本,接种于4周龄、雄性的裸小鼠右腋侧皮下,待瘤块生长至合适大小后取下瘤块,部分冻存,其余按相同的方法进行传代,如此一共3次,获得前列腺癌肿瘤动物模型。将大部分荷瘤裸鼠模型随机分成2组,通过鼠尾静脉注射本实验室提供的CTL进行前列腺癌免疫治疗的体内实验,观察并记录数据,最后利用SPSS统计软件分析治疗结果;收获裸鼠瘤块,冻存一部分用ELISA方法测定TGF-β水平、提取肿瘤相关抗原并刺激肿瘤反应性CTL增殖;其余新鲜组织用组织块培养法进行前列腺癌细胞原代培养,观察细胞生长状态。结果:1.获得前列腺癌肿瘤动物模型14只,利用12只(治疗中死亡1只)随机分为两组进行治疗实验,治疗前两组平均体积对比经SPSS 13.0软件进行t检验,P>0.05,差别无统计学意义,治疗后体积对比p<0.01,差别具有统计学意义;2.将剩余2只裸鼠瘤块大部分收集冻存,与之前冻存的瘤块一起用于提取肿瘤相关抗原并刺激CTL增殖。加入肿瘤抗原与不加肿瘤抗原相比,CTL数量扩增明显;同一患者血清TGF-β水平为4.873ng/ml,裸鼠种植与手术所获瘤块TGF-β水平为12.116ng/ml、8.368ng/ml,前者大于后者。3.裸鼠过继培养来源的组织块进行原代细胞培养,虽然没有建立稳定传代的细胞系,但与直接组织块培养法结果对比,细胞成分更为单一,生长和增殖能力增强。结论:1.利用TGF-β不敏感肿瘤反应性的CTL细胞进行前列腺癌免疫治疗研究具有重要的临床应用价值,利用裸鼠建立前列腺癌荷瘤模型,并以此作为载体进行体内治疗实验研究是简捷、经济、有效的研究方法。2.前列腺癌的标本量比较少,而通过裸鼠体内过继培养,可以有效地扩增前列腺癌组织块,在进行其他相关研究,比如提取肿瘤相关抗原刺激CTL增殖时,可解决肿瘤相关抗原来源不足的问题;裸鼠来源的瘤块TGF-β相对含量高于手术标本,说明以TGF-β通路为途径进行前列腺癌免疫治疗研究是有意义的。3.通过裸鼠过继培养之后的癌块进行原代培养时,细胞体外生长和增殖能力优于体外直接组织块培养方法,为体外建立前列腺癌细胞系提供了良好的途径。
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