原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)最终发育成精子和卵子并将遗传信息传递给下一代，因此为研究遗传操作提供了一种理想的细胞类群。同源重组(Homologous recombination，HR)是精细遗传编辑中最有效的技术手段，然而效率在脊椎动物中很低。利用斑马鱼作为体内模型，本研究旨建立基于PGC操作和“荧光凋亡正负筛选”策略的高效基因打靶技术。　　首先，我们通过将UAS:mRFP-nos1载体显微注射到Tg(kop: KalTA4)转基因胚胎中标记PGCs来建立转基因品系。结果表明，筛选PGCs特异mRFP表达胚胎的方法能够相对提高转基因生殖系传递效率。　　随后，我们建立了PGCs中HR效率评估体系，并且证明抑制DNA ligaseⅣ(Lig4)和Xrcc6（曾用名Ku70）的活性不但在全胚胎水平而且在PGCs水平都能够显著提高HR的效率。　　最后，我们着手在斑马鱼socs3a基因位点建立基因打靶技术平台，依次设计三种基因打靶策略。在“启动子捕获”打靶策略中，我们证实打靶载体设计有效。然而，筛选得到的嵌合体胚胎的PGCs不一定发生基因打靶事件，增加了后代筛选难度。在验证了“荧光凋亡正负筛选”策略可行后，我们尝试在PGCs水平进行基因打靶技术研究。在“荧光正筛选”基因打靶策略中，我们未能在F1代检测到预期的基因打靶产物，表明“凋亡负筛选”因子是必要的。最终，在“荧光凋亡正负筛选”基因打靶策略中，我们从1200颗胚胎中找到3颗表达PGC特异mRFP的胚胎;同时检测到基因打靶在全胚胎水平的效率是10％。至此，基因打靶技术初步建立，相关研究仍在继续中。　　综上所述，我们认为Tg(kop:KalTA4)转基因品系是研究HR介导的基因打靶技术的一个很好的平台。并且，结合“荧光凋亡正负筛选”基因打靶策略，我们初步建立了一个有效基因打靶技术平台。