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目的:自噬作为先天性免疫的一部分在多种病原体的入侵过程中发挥着至关重要的保护性作用,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染可以诱导自噬的发生,但该自噬过程对HBV并没有清除作用。本课题主要研究HBV所诱导的自噬无法清除HBV的原因及其潜在的机制。方法:HBV质粒p1.3?HBV(pHBV)转染HepG2(pHepG2)细胞,western blot方法检测HepG2细胞、pHepG2细胞、饥饿诱导自噬处理的HepG2细胞及稳定表达HBV DNA的HepG2.2.15细胞中自噬相关蛋白(autophagy-related protein,Atg)5、微管相关蛋白轻链(microtubule-associated protein light chain3-II,LC3-II)的表达。透射电镜的方法直接观察HepG2细胞和pHepG2细胞中自噬小体的形成。将pHBV质粒通过尾静脉高压注射C57BL/6构建小鼠肝炎模型,96小时后收集小鼠血清和肝组织,分别用Roche COBAS HBV Amplicor MonitorTM和ARCHITECT i2000SR HBsAg QT的方法检测小鼠血清中HBV DNA和乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的含量;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,H&E)染色的方法分析小鼠肝脏组织学改变情况;western blot的方法分析小鼠肝组织中Atg5和LC3-II的表达;荧光共聚焦显微镜检测HepG2细胞和pHepG2细胞中自噬小体与溶酶体融合形成自噬溶酶体的情况;半定量PCR方法检测HepG2细胞、pHepG2细胞、饥饿诱导自噬处理的HepG2细胞及HepG2.2.15细胞中Ras相关蛋白7(Ras-related protein 7,Rab7)mRNA的表达情况,western blot方法检测上述四组细胞中Rab7蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,pHepG2细胞、HepG2.2.15细胞和饥饿诱导自噬处理的HepG2细胞中Atg5和LC3-II的表达均明显升高;此外,透射电镜观察到,与HepG2细胞相比,自噬小体在pHepG2细胞中的积聚更明显;pHBV质粒尾静脉高压注射可以引起小鼠肝脏明显的炎性改变,肝炎小鼠肝组织中Atg5和LC3-II的表达也明显升高;关于自噬流变化的研究中发现,pHepG2细胞中自噬小体和溶酶体的融合受阻;此外,与对照组相比,Rab7在饥饿诱导自噬处理的HepG2细胞中明显升高,而在pHepG2细胞和HepG2.2.15细胞的表达却明显降低。结论:HBV在细胞和小鼠体内均能诱导自噬小体的形成;自噬小体和溶酶体的融合受阻导致HBV诱导的自噬无法清除乙肝病毒;而Rab7的减少是导致自噬小体和溶酶体融合受阻的主要原因;本研究结果显示HBV通过抑制Rab7而使自噬小体和溶酶体的融合受阻,进而逃避自噬的清除作用,这为HBV的治疗提供了新的切入点。