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目的:鞘氨醇激酶1（SphK1）在多种急慢性肝损伤的过程中发挥了至关重要的作用。过量对乙酰氨基酚（APAP）导致的急性药物性肝损伤是世界范围内引起急性肝衰竭的重要原因之一。越来越多的证据表明,NLRP3炎性小体在过量APAP诱导的药物性肝损伤中起重要作用。NLRP3炎性小体的激活可导致细胞焦亡。然而目前尚不清楚肝细胞焦亡是否参与过量APAP诱导的急性药物性肝损伤的早期阶段。本论文旨在探讨肝细胞SphK1在过量APAP诱导的肝细胞焦亡和急性药物性肝损伤中的作用及机制。方法:1、分离培养雄性C57BL/6J小鼠原代肝细胞并用5 mM的APAP诱导肝细胞损伤,通过活细胞成像系统和转染实验,验证过量APAP对小鼠原代肝细胞焦亡的影响及分子机制。小鼠腹腔注射250 mg/kg APAP后,通过免疫荧光染色、免疫印迹实验、实时荧光定量PCR,检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白以及SphK1的表达水平。2、构建SphK1肝细胞特异性基因敲除(SphK1Hep-/-)小鼠,以及分离培养SphK1Hep-/-小鼠的原代肝细胞,确定肝细胞缺失SphK1对过量APAP诱导急性药物性肝损伤的影响及分子机制。3、通过小鼠原代肝细胞转染SphK1腺病毒过表达载体,验证肝细胞SphK1对过量APAP导致肝细胞焦亡和急性药物性肝损伤的保护作用。结果:1、过量APAP会诱导小鼠原代肝细胞发生焦亡,且依赖于Caspase1的激活。用过量APAP诱导雄性C57BL/6J小鼠发生急性肝损伤,小鼠肝组织中cl-Caspase 1、GSDMD-N、SphK1的蛋白表达水平显著增加。2、用过量APAP诱导SphK1Hep-/-小鼠和WT小鼠发生急性肝损伤后,与WT小鼠相比,SphK1Hep-/-小鼠呈现更高的死亡率和更强的肝毒性。肝细胞SphK1特异性敲除会加剧APAP诱导的肝细胞焦亡和坏死。SphK1Hep-/-小鼠中增强的APAP肝毒性与NLRP3炎性小体的激活和Caspase 1的成熟以及细胞膜破裂有关。此外,miR-148a能直接抑制TXNIP的表达,肝细胞中缺乏SphK1会下调肝细胞中的mi R-148a,从而使硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）上调。而miR-148a mimic和TXNIP siRNA均能改善APAP诱导的NLRP3炎性小体激活和肝细胞焦亡。3、在过量APAP诱导的肝细胞损伤中,腺病毒介导的SphK1过表达能减轻APAP诱导的肝细胞焦亡,进一步证明了SphK1在过量APAP导致的肝细胞损伤中发挥保护作用。结论:肝细胞发生焦亡是过量APAP诱导肝损伤的早期特征之一。服用过量APAP过量后,肝细胞SphK1应激上调,特异性下调TXNIP,抑制NLRP3炎性小体激活和肝细胞焦亡发挥肝保护作用。