维氏气单胞菌JC529株LppB和Lpp/LppB基因缺失株构建及其生物学特性分析

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维氏气单胞菌(Aeromonas.veronii,A.veronii)是一种重要的人兽共患病病原体,属于气单胞菌属,在自然环境中普遍存在,具有广泛的宿主谱和显著的致病性,能够感染鱼类、两栖类和包括人类在内的哺乳动物,对水产养殖业的可持续性发展和人类的健康构成了严重威胁。近年来,人们对A.veronii已知的毒力因子进行了大量研究,而关于新毒力因子的研究却鲜有报道,因此,进一步探究新的毒力因子有利于揭示A.veronii的致病机理。细菌脂蛋白(LPP)作为重要的毒力因子,参与细菌定植、入侵、逃避宿主防御和免疫调节等多种致病机制,但LPP在A.veronii中相关研究较少,具体功能尚不明确。本课题以A.veronii JC529为研究对象,以课题组前期全基因测序分析结果和成功构建的脂蛋白Lpp缺失株ΔLpp为基础,利用同源重组法对脂蛋白Lpp B进行缺失,从而成功构建了Lpp B单缺失株ΔLpp B,以及Lpp、Lpp B双基因缺失株ΔLpp/LppB,随后又通过基因回补成功构建互补株。对上述成功构建的菌株进行遗传稳定性检测,结果显示良好,进而对缺失株、互补株和野生株的相关生物学特性进行分析。分析结果显示,ΔLpp/Lpp B和ΔLpp B与JC529相比,菌落形态和生长速度无明显变化,溶血活性无异,生物被膜形成能力下降,游动能力减弱,鞭毛部分脱落,细胞黏附能力下降,对小鼠的致病性减弱。ΔLpp/Lpp B与ΔLpp B相比,生物被膜形成能力降低,鞭毛脱落明显,细胞黏附能力下降,对小鼠的致病性减弱。互补株C-Lpp B和C-Lpp/Lpp B的生物被膜形成能力,游动能力,鞭毛数量等有部分恢复,但未恢复到原先水平。C-Lpp B对小鼠的毒力恢复到原先水平,但C-Lpp/Lpp B并未恢复。综上所述,通过对成功构建的缺失株、互补株和野生株之间相关生物学特性变化的对比分析,推测Lpp B和Lpp所编码的脂蛋白可能与A.veronii JC529的致病性有密切联系,本课题研究结果为之后A.veroni毒力因子方面的研究打下基础,有利于A.veronii致病机理的进一步研究。
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