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本文利用人食管癌细胞系SHEEC为靶分子，用这一细胞相同起源的人正常食管上皮细胞SHEE作为对照，对噬菌体展示随机多肽文库(Ph．D．-12 Phage Display Peptide Library)进行亲和筛选。之所以采取全细胞直接筛选的策略，是因为这种筛选方法与传统的纯化靶分子筛选相比，其作用方式更加接近天然的生物学状态，是一个不加选择压力的随机筛选过程，因此尤其适合于筛选诸如肿瘤细胞这样表面复杂度高、变异性强的细胞。
为了筛选出与SHEEC结合的高亲和力特异性噬菌体多肽，将筛选条件进行了优化。在每一轮正筛选之前，先用SHEE做“消减”，消减后的肽库不进行扩增直接用于正筛选。这样正在增加筛选特异性的同时尽量避免扩增引起的库的偏嗜性。在第一轮筛选中，选用了10<7>以上的细胞数量和不严格的洗涤条件，以避免低含量的特异性克隆因强洗涤而丢失。待扩增之后，在后两轮的筛选过程中逐渐降低细胞数量，并增加洗涤次数，力争得到高亲和力的特异性噬菌体多肽。经过三轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程，可以看出，从肿瘤细胞上洗脱下来的噬菌体滴度呈现出明显增加的趋势。在多肽文库中，噬菌体滴度从第一轮到第三轮增加了416倍，说明特异性的噬菌体多肽得到了富集。随后用每轮筛选后的次级库细胞结合试验，结果证实这些多克降噬菌体多肽都能与SHEEC细胞结合。
为了进一步说明这些单克隆是否具有与食管癌细胞结合的肿瘤特异性，首先进行了细胞水平的鉴定。采用人食管鳞状上皮细胞SHEE作为对照。采用了上述的策略验证多肽克隆的细胞水平的肿瘤特异性：挑取第三轮洗脱液铺板的单克隆46个，分别与SHEEC和SHEE做细胞结合实验。利用这一方法，得到了43个与SHEEC结合能力明显高于SHEE的克隆。由于SHEE是存人乳头瘤病毒18(human papil-lomavirus 18,HPV18)E6 E7 病毒癌基因作用下由人正常胎儿食管上皮转化来的人永生化食管上能上能下细胞第<[93]>，根据以往培养经验及有关文献<[99]>，这株细胞在传代会有少数细胞恶性转化，85代左右会表现出明显的恶性化。为了进一步验证这些克隆的食管癌细胞特异性，选取了人鳞状上皮细胞HACAT和作为埘照，通过细胞结合试验从上述克隆中鉴定得到5个不与HACAT结合的阳性克隆。由于SHEEC是在促癌物TPA(12-0--tetradecanoyl-phorbol-13-acetate)作用下由SHEE恶性转化来的肿瘤，为了考查这些克隆是否能结合恶性程度不同的食管癌细胞系，选取了恶性程度与SHEEC不同的EC9706做细胞结合实验。结果表明，在以上得到的克降中有相当一部分克隆可以结合恶性程度不同的食管癌细胞系而不识别人正常上皮细胞。随后，对得到的这些克隆进行测序，通过测序结果推导出相应多肽的氨基酸组成。为了考察这五个克隆与非鳞状上皮起源的细胞的结合能力，利用人肝癌细胞第HepG2及小鼠成纤维细胞系NIH3T3做细胞结合试验，从中鉴定出3个在结合人食管癌细胞系SHEEC的同时不与这两株细胞结合的噬菌体多肽。为了考查这3个克降是否会在机体内与其它的正常3组织结合，利用小鼠体内实验检测了该克隆在体内的生物学分布。将1.0×10<10>PFU的噬菌体多肽2.15-18C从尾静脉注入小鼠，测定不同脏器的噬菌体滴度。结果发现，噬菌体滴度最高的器官是食管和胃，最多也只有2.0×10<4>/mL.g.这就表明在体内噬菌体多肽克隆2.15-18C几乎不与其它正常组织结合。计划下一步利用食癌肿瘤模型考查其在体内的肿瘤靶向性。