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中药及民族药在治疗哮喘、心脑血管等疑难杂症方面具有独到之处,但是其复杂的有效成分和药理活性研究成为制约其现代化应用的关键问题,因此,以体现整体观和系统论为特色的中医药及民族医药基本理论为基础,采用现代科学研究手段,开展中药及民族药的物质基础及作用机理研究是十分必要的。胡颓子叶和灯盏细辛是临床上分别用于防治哮喘和缺血性中风的药物,二者的应用历史悠久,在中药及民族药中占有重要地位,且均被中国药典收载。本文在课题组前期工作基础上,进一步对胡颓子叶进行了化学成分及抗哮喘相关药理活性研究;对灯盏细辛进行了提取纯化和片剂的制备研究,旨在开发新的制剂处方工艺。 具体研究工作如下: 1、胡颓子叶化学成分的研究:以 70%乙醇溶液回流提取胡颓子叶药材 4.6 kg,提取液经减压浓缩得醇提浸膏 886 g,醇提浸膏用蒸馏水悬浮、萃取,得石油醚部位(39.8g)、乙酸乙酯部位(161.5g)、正丁醇部位(65.0g)、水部位(420g)。对水部位进行 D101大孔吸附树脂洗脱、反相 C18键合硅胶柱洗脱、LH-20 葡聚糖凝胶洗脱和半制备型 HPLC 纯化,获得化合物 1、2、6。对正丁醇部位进行硅胶柱洗脱和半制备型 HPLC 纯化,获得化合物 3、4、5。通过 HR-ESI-MS、1D/2D NMR鉴定化合物的结构,并且确定化合物 1为新化合物:山奈酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-半乳糖吡喃糖苷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,化合物2-6为首次从该属植物中分离得到。此外,采用 MTT法测定化合物 1-6对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞(ASMCs)增殖的抑制率,结果表明化合物 1-6 均不会加重ASMCs的增殖。 2、胡颓子叶总黄酮的抗炎、抗哮喘作用:运用 MTT 法检测不同浓度的胡颓子叶总黄酮对RAW264.7细胞的毒性作用;加入LPS诱导小鼠RAW264.7细胞建立炎症模型,观察不同浓度胡颓子叶总黄酮对炎性细胞因子(NO、IL-6)的分泌量变化,从而确定总黄酮的抗炎作用效果。通过 OVA 诱导建立过敏性哮喘小鼠模型,设置正常对照组、哮喘模型组、总黄酮组(20 mg/kg)、地塞米松阳性药组(3 mg/kg)四组小鼠,采用 HE 染色观察肺组织和气管病理改变,采用 ELISA法检测中血清中 IgE(OVA-sIg E)、BALF上清中 IL-5、IL-10和 TNF-α等细胞因子的含量;用瑞氏染液计数全血和 BALF 中白细胞的种类和数目;western blotting 实验探究总黄酮对MAPK信号通路的作用。结果表明:胡颓子叶总黄酮能够显著减少 OVA 诱导的过敏性哮喘小鼠血清中 OVA-sIg E的含量,显著降低BALF中由Th2细胞分泌的IL-5和白细胞分泌的TNF-α等炎性细胞因子的含量和炎性细胞的数目,但是对免疫调节细胞分泌的 IL-10 的含量无明显作用;HE 染色结果显示,总黄酮能够显著抑制过敏性哮喘小鼠肺部的炎性细胞浸润,明显减轻了肺部水肿和肺组织的病理改变,降低炎症病理评分;胡颓子叶总黄酮能显著性抑制 ERK 的磷酸化,而对 p38 无明显影响,说明总黄酮对哮喘模型肺组织中 MAPK 的抑制作用主要表现在抑制 ERK的磷酸化上,表明总黄酮可通过抑制MAPK通路上的关键蛋白来发挥抗哮喘作用。从而证明胡颓子叶总黄酮对过敏性哮喘气道炎症具有一定的药理活性作用。 3、开展灯盏细辛中灯盏花素的提取纯化工艺(野黄芩苷含量≥90%),制备灯盏花素片剂,并开展其质量检查。以 70%乙醇溶液超声波提取灯盏细辛药材,醇提浸膏进行 HP-20大孔吸附树脂洗脱和酸沉工艺纯化。采用紫外分光光度法测定了醇提浸膏的出膏率和所含野黄芩苷的含量。结果表明:在(335±1) nm波长处测定大孔吸附树脂 20%,50%,80%乙醇洗脱部位的野黄芩苷含量分别为 29.6%, 58.1%, 23.0%,酸沉后测定的含量分别增至 98%, 79.8%, 42.1%,而 50%乙醇洗脱部位的得率最高达到 12.14%。以乳糖、蔗糖和 MCC为填充剂,以PVPP为崩解剂,制备了灯盏花素片剂(野黄芩苷含量≥90%),并开展其质量检查。优选灯盏花素片剂处方为主药 12%,MCC 40%,PVPP 30%,蔗糖 13%,乳糖 5%,硬脂酸镁 0.5%,50%乙醇适量。该提取纯化方法能获得较高野黄芩苷含量的灯盏花素,制备的片剂质量检查合格。制备工艺操作性强,重现性好,能适应于工业大生产的需求。