拟南芥UVRAG基因功能研究

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磷酸肌醇3-激酶是一种重要的脂激酶,参与调控细胞的存活、增殖、分化以及胞内运输等。植物中PI3K复合体的三个亚基VPS34、 ATG6、VPS15均已得到验证,而是否存在第四个亚基还不清楚。本文通过研究发现拟南芥中一个新的基因UVRAG,可能作为PI3K的一个调节亚基调控液泡蛋白的分选。我们获得了uvrag纯合突变体,通过表型观察,发现突变体呈现出幼苗顶端弯钩不能完全打开、主根呈波浪型生长、侧根数目减少、莲座叶较小且明显下卷等表型。通过基因功能回补,突变体的表型得到了恢复。根据之前的研究,我们认为突变体的表型可能与生长素的缺乏存在密切关系。通过重力响应、生长素处理等实验,也进一步研究验证了uvrag的生长素运输缺陷。通过启动子活性分析,发现UVRAG在维管组织(茎、叶脉)中表达量较高,这也暗示了UVRAG可能在物质运输方面发挥着比较重要的作用。突变体中生长素极性运输相关蛋白PIN1、PIN2、AUX1及生长素报告基因DR5的定位均出现部分异常,说明UVRAG可能通过介导生长素的极性运输来控制植物的器官发育和形态建成。另外,通过western检测,我们发现uvrag突变体中存在前体形式的2S白蛋白与12S球蛋白,很好地证明了UVRAG在液泡蛋白分选方面的重要作用。同时,通过酵母双杂交,我们也验证了UVRAG与PI3K其它亚基之间的相互作用。最后,通过对突变体的内吞速率和PIN2蛋白的胞内循环进行分析,证明了UVRAG也参与植物细胞的膜泡运输。综上,我们推测UVRAG可能通过调控液泡蛋白的分选,来控制拟南芥的正常发育。
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