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目的:1.研究越鞠甘麦大枣汤对皮质酮诱导的小鼠海马神经元细胞系(HT22)细胞损伤的神经保护作用。2.研究越鞠甘麦大枣汤对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的神经保护作用。3.研究越鞠甘麦大枣汤对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(BV2)炎症模型的保护作用。方法:HT22细胞系、BV2细胞系无菌培养,制备越鞠甘麦大枣汤水提液和含药血清,实验包括3个部分:1.以高浓度皮质酮(CORT)建立细胞损伤模型,实验分为5组:正常组(不含皮质酮的正常细胞组)、模型组(皮质酮损伤的细胞组)、越鞠甘麦大枣汤含药血清组(1%、5%、10%),四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测实验各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测实验各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测各组细胞AKT、p-AKT蛋白的表达。2.以高浓度谷氨酸建立细胞损伤模型,实验分为7组:正常组、模型组、越鞠甘麦大枣汤含药血清组(1%、5%、10%)、越鞠甘麦大枣汤水煎剂组、尼莫地平组。MTT法检测实验各组细胞存活率;ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率及细胞内活性氧自由基(ROS)的水平;Western blot法检测各组细胞海马N-甲基-D门冬氨酸受体亚单位2B蛋白(NR2B),环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB),磷酸化CREB(p-CREB),细胞外调节蛋白激酶(ERK),磷酸化ERK(p-ERK)蛋白的表达。3.以LPS溶液建立BV2细胞损伤模型,实验分为3组:正常组、模型组、越鞠甘麦大枣汤水煎剂组,MTT法检测各组细胞成活率,ELISA法测定各组细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的含量,Western blot法测定各组细胞内AKT、p-AKT、NF-KB(p65)蛋白表达水平。结果:1.高浓度的CORT使HT22细胞存活率明显下降、LDH漏出量显著增加,降低AKT、p-AKT蛋白的表达,体积分数为1%、5%、10%的越鞠甘麦大枣汤含药血清均能显著提高CORT条件下HT22细胞的存活率,减少细胞损伤,减少LDH的漏出量,提高AKT、p-AKT蛋白的表达。2.谷氨酸模型组细胞存活率显著下降,乳酸脱氢酶(LDH)释放率明显增加,细胞内活性氧(ROS)水平明显增加,NR2B蛋白的表达明显升高,CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白表达明显降低;越鞠甘麦大枣汤水煎剂组和尼莫地平组均能显著提高谷氨酸模型条件下HT22细胞的存活率,减少细胞损伤,减少LDH的释放率,降低细胞内ROS水平,降低NR2B蛋白的表达水平,增加CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白的表达;越鞠甘麦大枣汤含药血清组HT22细胞存活率并没有提高。3.LPS模型组细胞成活率下降,细胞外液中TNF-α、IL-1β细胞因子的含量上升,而IL-10的含量无明显变化,细胞内AKT、p-AKT、NF-KB(p65)蛋白表达水平提高;越鞠甘麦大枣汤水煎剂组细胞的成活率显著提高,细胞外液中TNF-α、IL-1β、IL-10的含量均下降,细胞内AKT、p-AKT、NF-KB(p65)蛋白表达水平下降。结论:1.越鞠甘麦大枣汤含药血清对CORT诱导的HT22细胞损伤具有显著的保护作用。2.越鞠甘麦大枣汤水煎剂对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤具有显著的保护作用。3.越鞠甘麦大枣汤水煎剂对LPS诱导的BV2细胞炎症模型具有显著的保护作用。