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【目的】研究细胞因子与肺癌患者并发慢性病贫血(Anemia of chronic disease,ACD)的关系,进一步通过研究GDF15等多种细胞因子对hepcidin m RNA表达的影响,探讨肺癌患者ACD的发病机制。【内容】采用ELISA方法检测肺癌不伴贫血与伴ACD、以及经治疗贫血改善后细胞因子变化;利用RT-q PCR检测EPO、TNF-а、IFN-а、IL-6及GDF15干预后对Hep G2细胞hepcidin m RNA表达的影响,在基因水平上研究这些因子与hepcidin的关系,探讨细胞胞因子与肺癌患者ACD的关系。【方法】1.对照组及实验组血清样本的采集与保存。2.肺癌不伴贫血与伴ACD、及伴ACD患者经EPO联合铁剂治疗后,血清细胞因子水平检测。3.细胞因子干预下Hep G2细胞的培养。4.总RNA的提取、逆转录。5.RT-q PCR检测各组Hep G2细胞hepcidin m RNA表达情况。【结果】1.1肺癌不伴贫血组EPO的x±s为9.7713±1.8365 m IU/ml;伴ACD组EPO的x±s为11.1427±2.4196 m IU/ml;两组间P=0.019,与对照组比较P均>0.05。1.2不伴贫血组TNF-а的x±s为47.7287±12.7084pg/ml;肺癌伴ACD组TNF-а的x±s为47.7447±10.9742pg/ml;与对照组比较P均<0.01,但两组间P=0.997。行EPO及铁剂治疗后TNF-а的x±s为46.339±6.5879pg/ml,与治疗前比较P=0.71。1.3不伴贫血组IFN-а的x±s为44.2967±10.9328pg/ml;伴ACD组IFN-а的x±s为44.1515±11.9766pg/ml;与对照组间比较P均<0.01,但两组间P=0.966。治疗后IFN-а的x±s为43.3551±4.4134pg/ml,与治疗前比较P=0.78。1.4不伴贫血组IL-6的x±s为21.4296±4.1447pg/ml;伴ACD组IL-6的x±s为25.0654±5.7418pg/ml;与对照组间比较P均<0.05,两组间P=0.043。治疗后IL-6的x±s为26.5229±5.8669pg/ml,与治疗前比较P=0.412。1.5不伴贫血组IL-1的x±s为27.4579±11.9027pg/ml;伴ACD组IL-1的x±s为27.5482±7.9909pg/ml;与对照组间比较P均<0.05,两组间P=0.974。治疗后IL-1的x±s为27.8543±8.1748pg/ml,与治疗前比较P=0.911。1.6不伴贫血组GDF15的x±s为1328.2018±250.2665pg/ml;伴ACD组GDF15的x±s为1165.6243±284.8024pg/ml;与对照组间比较P均<0.01,两组间P=0.042。治疗后GDF15的x±s为1353.9724±203.7395pg/ml,与治疗前比较P=0.019。1.7不伴贫血组ERFE的x±s为14.1748±4.0978ng/ml,与对照组比较P=0.009;伴ACD患者ERFE的x±s为11.1904±2.5595ng/ml,与对照组比较P=0.913,两组间P=0.01。治疗后ERFE的x±s为13.6387±3.4288ng/ml,与治疗前比较P=0.01。1.8不伴贫血组hepcidin的x±s为84.0033±13.5452ng/ml;伴ACD组hepcidin的x±s为96.3717±14.1686ng/ml;与对照组间比较P均<0.01,两组间P=0.003。治疗后hepcidin的x±s为88.0947±8.0399ng/ml,与治疗前比较P=0.047。2.1 rhEPO组与对照组比较,12小时:5IU/ml组hepcidin mRNA的x±s为0.9653±0.1106(P=0.617);10IU/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.7050±0.0847(P=0.031);20IU/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.6113±0.2403(P=0.004)。24小时:5IU/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.321±0.0236;10IU/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.2937±0.0214;20IU/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.2477±0.0185;P均<0.001。2.2 rhTNF-а组与对照组比较,12及24小时各组P均>0.05。2.3 rhIFN-а组与对照组比较,12小时:5ng/ml组hepcidin mRNA的x±s为2.4627±0.7571;10ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为1.8967±0.6091;20ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为2.3017±0.0058;P均<0.01。24小时:5ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为2.5623±0.0446;10ng/ml组hepcidin m RNA x±s为2.625±0.1891;20ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为3.2343±0.2043;P均<0.001。2.4 rh IL-6组与对照组比较:12小时:50ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.9603±0.0731(P=0.636);75ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为1.3407±0.2943(P=0.044);100ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为1.94±0.1522(P<0.001)。24小时:50ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为1.8663±0.1392;75ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为2.7413±0.1715;100ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为2.7407±0.1520;P均<0.001。2.5 rh GDF15组与对照组比较:12小时:10ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.8527±0.0397;20ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.7973±0.0309;40ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.6847±0.0881;P均<0.05。24小时:10ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.452±0.0785;20ng/ml组Hepcidin m RNA的x±s为0.2527±0.024;40ng/ml组hepcidin m RNA的x±s为0.2407±0.0255;P均<0.001。【结论】1、EPO联合静脉补铁是治疗肺癌患者ACD的一种安全有效方法。2、肺癌伴ACD患者EPO与对照组比较无明显升高,提示EPO对贫血的代偿不足。EPO可抑制hepcidin m RNA的表达,表明EPO在肺癌患者ACD的发病中起重要作用。应用EPO治疗,一方面通过克服EPO相对不足促进造血,另一方面可能通过影响GDF15、hepcidin等细胞因子间接改善贫血。3、未发现TNF-а、IL-1与肺癌患者ACD发病有明确的相关关系。IFN-а与肺癌患者ACD发病的关系有待进一步研究明确。4、伴ACD与不伴贫血肺癌患者的IL-6、GDF15、ERFE及hepcidin水平存在显著差异,伴ACD的肺癌患者经EPO等治疗贫血改善后,GDF15、ERFE及hepcidin水平均有明显变化,提示它们在肺癌ACD的发病中发挥作用。研究表明IL-6可促进hepcidin m RNA的表达,反之GDF15明显抑制hepcidin m RNA的表达,说明IL-6、GDF15与hepcidin存在密切关系,证明它们可能通过影响hepcidin在肺癌患者ACD发病中发挥作用。