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研究背景：缺氧现象在动物和人的实体肿瘤普遍存在。而缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor,HIF)是缺氧反应的主要调节因子,涉及肿瘤增生、代谢、血管生成、分化及转移等各个方面。且HIF在神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)中也具有重要作用,其中HIF-2α的表达与神经母细胞瘤的预后相关,HIF-1α在神经母细胞瘤的发生发展中具有作用。因此,有必要深入研究神经母细胞瘤中HIF-α的作用。二氯化钴(CoCl2)是常用的化学模拟缺氧剂,已在国内外得到广泛应用。建立神经母细胞瘤的缺氧模型,有利于对HIF的后续研究。目的：用不同浓度的CoCl2对细胞进行不同时间的培养来观察细胞的增殖活性和HIF-α的表达情况,从而确立CoCl2诱导神经母SK-N-SH细胞缺氧的适宜浓度和时间。方法：使用CoCl2作为缺氧诱导剂,在培养神经母SK-N-SH细胞时加入CoCl2。使用不同浓度的CoCl2培养液(0μM、50μM、100μM、150μM、200μM、300μM、600μM)诱导神经母SK-N-SH细胞缺氧,并培养不同时间(6、12、24、48、72和96h),然后用CCK-8检测细胞增殖活性,并观察细胞形态变化。同时,用荧光定量PCR和免疫荧光检测HIF在转录和翻译水平的表达情况。结果：1).CCK-8检测结果示SK-N-SH细胞在CoCl2浓度100gM作用72h,细胞增殖活性出现明显抑制(P<0.05)。细胞随着CoCl2浓度的提高及作用时间的延长,细胞活性逐渐明显降低,且胞体小、有神经突出的细胞逐渐消失。2).荧光定量PCR示,HIF-la mRNA、HIF-2a mRNA、CXCR4mRNA的转录在CoCl2浓度100μM作用72h时,与作用Oh组相比均出现显著的升高(P<0.05)。3).免疫荧光显示,细胞未经CoCl2处理时HIF-1α未见明显表达,HIF-2α则主要表达于细胞浆中；而经CoCl2浓度100μM作用72h时,HIF-1α在细胞核中强表达,HIF-2α则细胞浆及细胞核中均有表达且以细胞核为主。结论：CoCl2诱导神经母SK-N-SH细胞缺氧时的适宜条件是CoCl2浓度为100μM、作用时间为72h。HIF-1αmRNA、HIF-2αmRNA、CXCR4mRNA在CoCl2浓度100μM作用72h时,转录水平均明显升高,提示HIF与肿瘤转移相关。