【摘 要】
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CD40L-CD40信号通路是免疫系统中一个关键调节信号通路,一方面可以促进抗原递呈细胞(如树突状细胞)的抗原递呈能力;另一方面可以激活B细胞,促进抗体产生;CD40介导的信号通路
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CD40L-CD40信号通路是免疫系统中一个关键调节信号通路,一方面可以促进抗原递呈细胞(如树突状细胞)的抗原递呈能力;另一方面可以激活B细胞,促进抗体产生;CD40介导的信号通路在中枢免疫耐受的建立过程中也起关键的作用,因而CD40L-CD40已经成为抑制移植排斥、防治自身免疫性疾病和促进抗肿瘤免疫应答等的一个重要靶点。本论文中,首先优化CD40胞外段结构域(CD40-N)基因的核苷酸序列,克隆到毕赤酵母中,进行分泌表达。SDS-PAGE和Western blot分析显示在甲醇诱导下,重组蛋白CD40-N在毕赤酵母培养上清中能分泌表达。经过超滤、Sephadex G-50凝胶过滤层析和Q Sepharose FF离子交换层析等步骤纯化重组蛋白,获得纯度达到90%以上的重组蛋白,一系列体外体内实验显示CD40-N重组蛋白能够阻断CD40L或CD40激动抗体激活的CD40信号。此外,我们利用人弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)小鼠移植瘤模型(PDX)发现该重组蛋白也能抑制DLBCL的肿瘤生长。我们建立了一个简单高效的CD40-N表达纯化系统,为其科研和潜在的临床应用奠定了基础。
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