敲除Meq基因的重组鸡马立克氏病毒与CVI988/Rispens疫苗株免疫保护效力的比较研究

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马立克氏病是世界上唯一可以使用疫苗预防的肿瘤性疾病,它的预防给人类肿瘤疾病的研究建立了很好的模型。但是,随着MDV疫苗的不断使用,在免疫选择下马立克氏病病毒的毒力也在不断的增强,早期的HVT疫苗很难控制目前一些超强毒株的MDV,即使是在世界各国广发使用的CVI988/Rispens疫苗株免疫的鸡场,依然常见有MD的爆发,为了更好的控制MDV给养禽业带来的损失,世界各国科研工作者正在不断的研发MDV疫苗,如美国禽病肿瘤研究所构建的Md5△Meq能够提供针对Md5超强毒株的免疫保护作用,在此基础上,本实验室构建完成了bac-GX0101△Meq△Kana毒株并筛选到了一备用疫苗株,命名为SC9-1,本试验对SC9-1毒株的免疫保护作用进行了比较性研究。  在敲除抗卡那霉素基因之前,苏帅等人已经比较了SC9-1毒株前身bac-GX0101△Meq株与CVI988/Rispens标准疫苗株之间针对Md5超强毒的免疫保护作用,结果bac-GX0101△Meq能够提供100%的保护力,而相同的条件下,CVI988/Rispens在SPF鸡上对超强毒Md5的保护力只有89%。而作为疫苗带有抗卡那霉素抗性的基因是不符合生物安全要求的,在敲除抗卡那霉素基因以后,bac-GX0101△Meq基因组序列发生改变后,它针对外源MDV感染的防治是否还是有效呢?本研究再次系统的的比较了SC9-1与商品化CVI988/Rispens疫苗间的免疫保护作用。苏帅等人使用的攻毒毒株为Md5毒株,但是本研究为了更全面的评价SC9-1毒株的免疫保护作用,选用了另一毒力稍弱的超强毒株GX0101。  然后,本研究系统的比较了SC9-1毒株与标准疫苗株CVI988/Rispens对MDV超强毒GX0101攻毒的免疫保护作用。在实验设计方面选择了不含母源抗体的SFP鸡和含有母源抗体的海兰褐鸡作为实验动物,本实验将1日龄SPF鸡120只随机分成4组,每组30只,分别饲养在正压过滤空气的SPF动物饲养隔离罩内。1日龄时,第1组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种SC9-1;第2组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种CVI988/Rispens;第3、4组为不免疫攻毒对照组。免疫接种5天后,第1、2、3组分别以2000PFU/只的剂量腹腔接种MDV GX0101。饲养至90日龄,记录死亡情况,对死亡鸡只剖检,并取疑似马立克特有病变脏器做病理切片。期间,检测不同免疫状态下病毒GX0101的增殖动态以及禽流感、新城疫灭活苗在鸡体诱导产生抗体的水平。对含有MDV母源抗体的海蓝褐鸡的试验方案与SPF鸡一致。  经试验比较,SC9-1株对感染MDV GX0101的SPF鸡、海兰褐鸡均提供100%的免疫保护作用;CVI988/Rispens对SPF鸡、海兰褐鸡分别提供86.7%、93%的免疫保护作用。未免疫SPF鸡攻毒组死亡率为53.3%,肿瘤率为16.7%;未免疫海兰褐鸡攻毒组死亡率为36.7%,肿瘤率为6.67%;相比,空白对照组鸡只没有任何病变及死亡。荧光定量结果显示,淋巴细胞和羽毛囊DNA中,SC9-1免疫组鸡体内GX0101的病毒拷贝数显著低于CVI988/Rispens免疫组。血凝抑制试验结果显示,SC9-1免疫攻毒组鸡的产生的AIV、NDV抗体水平高于CVI988/Rispens免疫攻毒组。所以,SC9-1株免疫无论在SPF鸡还是含有MDV母源抗体的海兰褐鸡均能提供比CVI988/Rispens更好的免疫保护效果。
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