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牛环形泰勒虫病是由环形泰勒虫引起的蜱传血液原虫病,给热带、亚热带和温带等地区的畜牧业生产造成了严重威胁。病原入侵会引起宿主细胞产生复杂的天然免疫反应,其中,TLRs和NLRs信号通路在抗寄生虫感染中发挥重要的免疫调节作用。但是,目前对参与抗环形泰勒虫感染的先天免疫相关机制知之甚少。因此,本研究采用实验室保存的环形泰勒虫喀什株作为研究对象,通过转录组测序、PCR Aarray、ELISA等技术和方法,针对环形泰勒虫感染牛引起的先天免疫信号通路关键分子的变化进行研究,鉴定参与牛抗环形泰勒虫感染的TLRs和NLRs信号通路相关的重要分子。 首先,本研究建立了牛环形泰勒虫LF-RPA检测方法,为后续体内感染环形泰勒虫的检测提供技术保障。此外,经少量临床样品验证,LF-RPA可作为一种有效的检测方法,用于该病临床样本的检测。 其次,通过对新疆、辽宁、甘肃、内蒙古、天津和海南6个省区的牛环形泰勒虫进行种群遗传结构比较分析,进一步了解新疆种群的遗传特点。与其他地区种群相比,种群遗传特征和MOI分析发现,新疆种群的多样性和虫体基因型更为丰富。DAPC分析结果表明了新疆种群可能存在种群亚结构。配对FST值分析结果显示,新疆种群表现出高度遗传分化现象,说明与其他种群之间基因交流较弱。 再次,通过RNA-seq对环形泰勒虫子孢子刺激后的牛PBMC进行转录表达谱分析。在TLRs信号通路中,下游的趋化因子CXCL9和CXCL10上调表达,在NLRs信号通路中,NOD2、ASC和CCL2上调表达。结果表明两条信号通路均在感染72h后发挥免疫调节作用。ELISA检测结果表明,在感染初期,细胞上清中IL-1β、IL-6和TNFα的浓度均显著降低,而在感染72h后开始升高。综上结果说明感染初期PBMC的先天免疫反应并不明显,推测子孢子的入侵对宿主产生了免疫抑制作用,从而实现环形泰勒虫裂殖体在宿主体内的寄生。 最后,通过PCR Array检测了牛感染环形泰勒虫子孢子之后的TLRs和NLRs信号通路中相关分子。与感染前相比,42个基因的相对表达量在感染后的72h、96h、120h和168h发生了变化,其中12个基因(TLR1、TLR6、TLR10、MyD88、NLRP1、IRF3、TBK1、CD40、CD86、IFNA1、IFNB1和TNFα)的表达量变化差异显著(P<005)。ELISA检测结果表明,感染后期(168h p i),血清中IL-1β、IL-6、TNFα和IFNγ的浓度显著升高,说明在环形泰勒虫感染期间以Th1型免疫反应为主。 本研究结果有助于更好的了解环形泰勒虫感染引起的免疫机制,为制定合理的诊断和治疗牛环形泰勒虫病的临床新策略奠定理论基础。