2型RA42KDa外膜蛋白的原核表达及免疫活性研究

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本试验利用PCR技术扩增了标准血清2型RA的42KDa外膜蛋白基因片段(OmpA-2)1045bp,与原核表达载体pGEX-4T-1连接构建重组表达载体,转入大肠杆菌BL21菌株中。在1mM的IPTG诱导下,表达融合蛋白,诱导后5h蛋白表达量达到高峰。融合表达蛋白GST-OmpA1-2的分子量约为65KDa,以包涵体形式存在。 以脱氧胆酸钠(DOC)洗涤包涵体,然后用N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解,将溶解包涵体进行透析复性。分别用亲和层析法、电洗脱法和研磨法对GST-OmpA1-2融合蛋白进行了纯化,亲和层析纯化效果不佳,电洗脱法和研磨法则获得了较好的纯化效果。 将GST-OmpA1-2融合表达蛋白免疫鸭,采血分离血清。GST-OmpA1-2以0.85μg/mL的浓度包被酶标反应板,鸭抗2型RA阳性血清进行200×稀释,HRP-山羊抗鸭IgG作5000×稀释,建立间接ELISA方法检测免疫鸭的抗体水平。间接ELISA和Western-blotting试验结果均表明GST-OmpA1-2表达蛋白具有良好的反应原性。以2型RA强毒攻击免疫鸭,结果表明GST-OmpA1-2表达蛋白对免疫鸭不能提供完全保护。 研究认为GST-OmpA1-2表达蛋白具有良好的反应原性,阻断试验表明不存在血清型特异性,所以,GST-OmpA1-2可望作为包被抗原用于RA的诊断试剂盒的制备。
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