目的：随着人们生活水平的日益提高，无论在发达国家或是发展中国家，代谢综合征发病率逐渐升高。2型糖尿病、肥胖等，已成为人类健康的重大威胁。此类人群比正常人群更易出现心血管疾病，其原因在于：长期的、慢性的血脂肪酸水平升高，可导致动脉粥样硬化，并可损伤冠状动脉内皮细胞，导致缺血性心肌损伤；值得引起重视的是，高脂肪酸水平也可直接损伤心肌细胞，诱导细胞凋亡，称为脂毒性心肌损伤。棕榈酸(palmitate，PA)，一种常见的饱和脂肪酸，被广泛应用于体外细胞培养，制造脂毒性损伤模型进行实验研究。PA已被证实可诱导包括心肌细胞在内的多种组织细胞凋亡，而心肌细胞凋亡是心功能衰竭、再灌注损伤等的重要原因。因此，减轻心肌细胞凋亡可能是对抗脂毒性心肌损伤的关键策略。临床试验证实，长期、规律摄入绿茶可以降低血清胆固醇水平、降低体内脂肪含量、抑制脂肪细胞生成、降低体重，对于维持体内脂质代谢的稳态具有重要作用。作为绿茶中提取的茶多酚生物活性的主要成份，表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)被证实具有极强的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用，被广泛应用于心血管领域和肿瘤领域的基础研究。重要的是，也有研究证实，无论是在体动物模型还是体外细胞模型，EGCG对于脂质代谢均可发挥调节作用。在体动物实验证实，于饮食中加入一定剂量EGCG可降低血清胆固醇含量和身体质量指数(body mass index，BMI)。体外细胞实验证实，EGCG可直接减轻PA导致的脂毒性内皮细胞凋亡。以上证据提示，EGCG具有调节脂质代谢和保护脂毒性损伤的双重作用。然而，针对EGCG对于心肌细胞的脂毒性损伤是否具有保护作用，目前尚未明确。本研究拟通过高脂培养基进行H9C2心肌细胞体外培养，建立心肌细胞脂毒性损伤模型，通过ERS抑制剂4-PBA研究ERS相关的凋亡在高脂损伤中的作用，研究脂毒性心肌损伤的分子机制;探讨EGCG预处理对于心肌细胞高脂损伤的保护作用，并通过信号通路抑制剂进一步研究EGCG对抗脂毒性心肌损伤的相关分子机制。　　方法：⑴将H9C2心肌细胞分为4组，对照组培养基中含有0.1％BSA，模型组分别以不同浓度(100μM、200μM、400μM) PA培养12小时，油红O染色法鉴定高脂模型建立。⑵采用不同浓度的PA(0-500μM)处理细胞不同的时间（0小时，6小时，12小时，24小时），通过CCK-8法检测细胞活力，并根据该检测结果选择后续实验中合适的PA处理条件。⑶将H9C2心肌细胞分为4组，对照组培养基中含有0.1％BSA，模型组分别以不同浓度（100μM、200μM、400μM）PA培养12小时，诱导脂毒性损伤。分别用可见分光光度计检测细胞培养上清液中LDH含量，流式细胞术检测细胞凋亡情况，western blot技术检测不同浓度PA对心肌细胞中GRP78，CHOP， Cleaved caspase-12，PERK/eIF2α通路分子表达的影响。⑷将H9C2心肌细胞分为5组:分别以PA400μM培养不同时间（0小时，3小时，6小时，12小时，24小时），以western blot技术检测PERK，p-PERK，eIF2α，p-eIF2α，ATF4，CHOP，Cleaved caspase-12的表达情况，探讨PERK通路分子和ERS相关凋亡蛋白在PA诱导脂毒性损伤过程中的变化规律。⑸将H9C2心肌细胞分为3组：对照组培养基中含有0.1％BSA，培养12小时；PA模型组以PA400μM培养12小时；4-PBA组:先以5mM的4-PBA预处理90分钟，再加入PA400μM共同培养12小时。以流式细胞术检测4-PBA对PA导致细胞凋亡的影响，以western blot技术检测4-PBA对PA培养下ERS相关凋亡蛋白CHOP、Cleaved caspase-12的影响。⑹以不同浓度（1.0μM，5.0μM，10μM，25μM，50μM）的EGCG预处理细胞后加入PA400μM共同培养12小时，以CCK-8法检测EGCG对于PA培养下细胞活力的影响，根据该检测结果选择后续实验中合适的EGCG处理条件。⑺选择具有最佳保护作用的2个浓度EGCG5μM和10μM作为后续实验条件，检测培养上清液中LDH含量、DAPI染色检测细胞凋亡、western blot技术检测p-Akt与Akt表达。进一步观察EGCG的保护作用及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。⑻在EGCG实验基础上，加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002，以western blot技术检测Cleavedcaspase-3，CHOP，Cleaved caspase-12，PERK，p-PERK，eIF2α，p-eIF2α蛋白表达，探讨EGCG对抗脂毒性损伤作用的分子机制。　　结果：①PA培养12小时即可导致H9C2细胞活力下降，从PA200μM至500μM心肌细胞活力逐渐下降，呈PA剂量依赖性。选择PA100μM，200μM，400μM进行后续实验，发现PA200μM以上浓度处理12小时可引起LDH释放增加。②流式细胞术结果提示PA200μM以上浓度可引起细胞凋亡率增加;western blot结果提示PA可上调ERS标志性分子GRP78、ERS凋亡蛋白CHOP和Cleaved caspase-12、PERK通路蛋白的表达，且上述改变均呈现明显的正性PA剂量依赖性。③以PA400μM处理细胞3小时、6小时、12小时、24小时，western blot技术结果提示，PERK分子在PA处理后的3小时显著激活，表现为磷酸化水平的提高;作为p-PERK的特异性底物，p-eIF2α在3小时显著激活，6小时达峰值;下游的ATF4在PA处理的6小时显著激活，此后表达量逐渐升高，24小时达峰值。作为ERS相关凋亡的特异性分子，CHOP和Cleaved caspase-12在PA处理的12小时表达量显著提高，并持续至PA处理后的24小时。④流式细胞术结果显示，以ERS特异性抑制剂4-PBA5mM预处理90分钟，显著降低PA导致的心肌细胞凋亡，western blot结果提示4-PBA可显著下调ERS相关凋亡特异性蛋白CHOP和Cleaved caspase-12的表达，说明ERS相关的凋亡作为重要机制参与PA导致的心肌细胞脂毒性损伤。⑤以EGCG预处理细胞，CCK-8结果显示EGCG5μM和10μM对于PA400μM导致的细胞损伤有最佳保护作用，该结果被进一步的LDH含量和DAPI染色结果所证实。PA处理可显著降低心肌细胞的Akt分子磷酸化水平，EGCG5μM和10μM可部分恢复Akt分子的磷酸化水平的降低，发挥上调PI3K/Akt信号通路活性，对抗脂毒性损伤的作用。⑥EGCG10μM预处理前加入LY294002预处理1小时，可部分抵消EGCG10μM对于脂毒性损伤的保护作用，体现为:EGCG降低凋亡率、下调凋亡执行蛋白Cleaved caspase-3表达、下调ERS特异性凋亡蛋白CHOP和Cleaved caspase-12的表达、抑制PERK/eIF2α通路过度活化的作用均被LY294002部分抵消。　　结论：⑴PA可呈剂量依赖性和时间依赖性的方式激活H9C2心肌细胞ERS、PERK/eIF2α/ATF4信号通路，继而激活ERS相关的凋亡通路，导致细胞损伤。ERS抑制剂4-PBA可显著减轻PA导致的心肌细胞凋亡。⑵EGCG可提高PA培养下的H9C2心肌细胞活力，降低细胞凋亡率及凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达，降低LDH释放，对抗脂毒性损伤。⑶EGCG可上调PA培养下的H9C2心肌细胞PI3K/Akt信号通路活性，进而抑制ERS、PERK/eIF2α信号通路的过度激活，下调ERS相关凋亡蛋白CHOP、Cleaved caspase-12的表达，减轻细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002可部分抵消EGCG的上述保护作用，故EGCG的保护作用可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的。