论文部分内容阅读
目的:
观察异氟烷、七氟烷急性暴露对E17大鼠海马神经干细胞增殖的影响,探讨挥发性麻醉药影响胎鼠海马神经干细胞发育的机制。
方法:
1.用机械吹打法分离培养E17SD大鼠神经干细胞并稳定传至3-4代,行nestin免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞.
2.将细胞随机分为3组:对照组(C)、3.6%七氟烷组(S)、2.3%异氟烷组(D,每组暴露6h后行CCK-8检测,并采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)方法及免疫蛋白印迹(WesternBlot)检测方法来测定样本中Sox2、BDNF、GABAARα1mRNA及蛋白含量。
3.将细胞随机分为2.3%异氟烷组(D、异氟烷+miscimol组(IM)、异氟烷+bicuculline组(IB)3组,暴露前半小时IM组及IB组分别加入GABA-A受体激动剂misicimol(10uM)与拮抗剂bicuculline(50uM),每组分别暴露6h,6h后采用RT-PCR方法及WesternBlot检测方法来测定样本中Sox2、BDNF、GABAAR-α1mRNA及蛋白表达。
结果:
1.CCK-8检测显示,与C组相比,I组明显抑制了神经干细胞的增值(P<0.05),S组较对照组差异无统计学意义。
2.与C组比较,I组Sox2mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.05),BDNFmRNA及蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)
3.与I组比较,IM组Sox2mRNA及蛋白水平明显降低,BDNFmRNA及蛋白水平明显升高,IB组Sox2mRNA水平明显升高,BDNFmRNA水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)
4.GABAAR-α1的mRNA水平在各组间没有明显差异。
结论:
1.异氟烷、七氟烷急性暴露对E17海马神经干细胞发育的影响是不同的。异氟烷较七氟烷明显影响了神经干细胞的活性,抑制了神经干细胞的增殖。
2.异氟烷降低了Sox2mRNA及蛋白水平,并引起BDNF水平上调,其机制可能与激动GABAA受体有关。