【摘 要】
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目的:本文通过研究白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞系中NF-κB基因表达与活化状态的影响以及髓母细胞瘤和瘤旁小脑组织的石蜡包埋组织微阵列中的表达情况,分析NF-κB与髓母细胞瘤生
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目的:本文通过研究白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞系中NF-κB基因表达与活化状态的影响以及髓母细胞瘤和瘤旁小脑组织的石蜡包埋组织微阵列中的表达情况,分析NF-κB与髓母细胞瘤生长、分化和凋亡之间的关系,探讨白藜芦醇抗髓母细胞瘤作用的分子机制,以期加深对髓母细胞瘤细胞分子生物学特点的认识,为改善临床髓母细胞瘤的治疗现状提供新的实验室指标和理论根据。方法:人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和UW228-3以5x104/ml的密度铺于φ60mm及φ100mm的培养皿中,在含10%胎牛血清(美国GICBO公司)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中孵育24小时。将白藜芦醇(美国SIGMA公司)溶解于二甲基亚砜溶液(DMSO,demethylsulfoxide)中,使之达到5mM的储存浓度;使用前,将其稀释到100μM处理细胞。为便于细胞形态学观察和免疫细胞化学染色,将无菌盖玻片预先置于培养皿底部而后细胞铺皿。制成细胞悬液经离心沉淀后,用于RNA和蛋白质的提取。采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western-Blot和RT-PCR等方法分析白藜芦醇处理前后UW228-2和UW228-3中NF-κB基因的表达水平,尤其是活化状态的改变及其与白藜芦醇诱导的细胞分化和凋亡的关系。同时,从临床收集11例髓母细胞瘤及其对应的瘤旁小脑组织的石蜡包埋标本,利用自行研制的设备制成石蜡组织微阵列,进行NF-κB抗原的免疫组织化学染色,观察髓母细胞瘤及其对应的瘤旁小脑组织中NF-κB的表达状况。结果:1)白藜芦醇能有效抑制UW228-2和UW228-3细胞生长并诱导其分化和凋亡;2)免疫细胞化学、免疫荧光、RT-PCR和Western-Blot法均显示正常培养和白藜芦醇处理的人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和UW228-3中均有NF-κB表达,但白藜芦醇能明显诱导
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