基于核酸适配体的水中重金属检测技术条件优化及适用性研究

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重金属在地壳和水环境中分布广泛,在自然状况下,微量的重金属一般不会对人类健康造成影响。但近些年,随着人类社会的发展,重金属被广泛应用于工业、医药等领域,人为的造成大量重金属进入环境,使得环境受到污染。重金属污染的主要特点是可以在环境中通过食物链富集,只能转移,而不能被降解。对环境中重金属的监测已经引起广泛的关注。常用的重金属检测传统方法有原子发射光谱法、原子吸收光谱法、紫外-可见分光光度法、原子荧光法、质谱法等。这些传统检测方法对操作人员专业性要求较高,设备大,不便携。而近些年发展起来的基于重金属核酸探针的生物传感器技术,具有响应快速,操作方便等优点,因而具有很好的应用前景。本论文基于核酸适配体能够与重金属离子特异性结合,利用核酸适配体(aptamer)和核酸染料SYBR Green I构建了生物传感体系,对水中重金属离子Ag+和Hg2+进行检测,并对反应条件进行优化,对适用性进行了研究。主要内容如下:(1)胞嘧啶-胞嘧啶(C-C)/胸腺嘧啶-胸腺嘧啶(T-T)错配碱基对在有Ag+/Hg2+存在时,能够特异性的形成稳定的C-Ag+-C/T-Hg2+-T复合物。当反应体系中没有Ag+/Hg2+存在时,SYBR Green I只能吸附在单链DNA上,发出较弱的荧光。当加入Ag+/Hg2+后,单链DNA形成稳定的双链DNA,从而使得SYBR Green I能够嵌入双链DNA的小凹槽与之结合,使体系的荧光强度急剧增强,由此实现对Ag+/Hg2+的检测。实验条件优化后, Ag+检测的线性范围在100nM~1000nM之间,检出限达到59.9nM。Hg2+检测的线性范围为200nM~2.5μM,检出限为3.02nM。(2)考察了水中几种常见干扰因素Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Co2+、Mn2+、Cu2+、Pb2+、Al3+、Ni2+、Hg2+、铵盐、氟化物、游离氯、氯化物及碱度对该检测体系的影响,实验结果表明,上述这些干扰因素对Ag+/Hg2+检测体系影响较小,该检测体系具有应用于实际水样检测的适用性。(3)分别以桶装饮用水、地表水及地下水水样为研究对象,考察该检测体系对实际水样检测的性能,研究表明其对实际水样的检测结果是可以接受的。
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