研究背景与目的随着世界人口老龄化进程加速,骨质疏松症已成为全球公共卫生的一大挑战,其患病率的上涨也使得社会疾病负担逐年递增。目前关于骨质疏松的治疗由于副作用明显、药价昂贵,使得其治疗难以持续、有效地发挥作用,是当前骨质疏松症引起的脆性骨折发病率居高不下的重要因素。所以充分发掘和发现可用于预防和治疗骨质疏松的药物,减轻骨骼慢性疾病产生的经济负担,寻求满足老龄群体需要的健康进程,是社会和医学发展的迫切要求。经过前期筛查研究探讨多种植物活性的有效成分,发现三叶豆紫檀苷可抑制破骨细胞分化。三叶豆紫檀苷（Trifolirhizin）是从苦参根中分离得到的一种天然紫檀素,对各种恶性肿瘤都有一定抑制作用。但三叶豆紫檀苷在骨代谢中的作用和功效仍不明确。因此,本课题通过进行体外细胞实验评估三叶豆紫檀苷对破骨细胞分化和骨吸收功能的影响。同时,构建卵巢切除小鼠模型以验证三叶豆紫檀苷对小鼠卵巢切除后发生的骨质疏松症的保护作用,并进一步探索三叶豆紫檀苷在其中的分子作用机制。方法体外实验包括:CCK-8检测分析三叶豆紫檀苷对单核巨噬细胞（BMMs）的毒性作用,TRAP染色探索三叶豆紫檀苷对破骨细胞分化影响。随后,在牛骨片上评估三叶豆紫檀苷对破骨细胞的骨吸收功能的抑制作用。通过ALP染色探索三叶豆紫檀苷对成骨细胞分化影响。荧光定量PCR实验检测三叶豆紫檀苷对破骨细胞分化过程中特异性基因表达的影响。免疫蛋白印迹实验探讨三叶豆紫檀苷调控破骨细胞分化的分子机制。体内实验:构建卵巢切除（OVX）小鼠模型,探讨三叶豆紫檀苷对雌激素缺乏引起的骨质丢失的保护作用。结果（1）三叶豆紫檀苷能浓度依赖性地抑制破骨细胞的分化功能,且破骨细胞在牛骨片上的骨吸收面积呈明显浓度依赖下降。（2）三叶豆紫檀苷处理后碱性磷酸酶活性无明显变化,表明40μM浓度的三叶豆紫檀苷对成骨细胞的分化的没有影响。（3）三叶豆紫檀苷能浓度依赖性地抑制破骨细胞相关基因NFATc1、CTSK、MMP9、DC-STAMP、ACP5和V-ATPase-D2的表达。（4）三叶豆紫檀苷能够抑制MAPK通路,对MAPK通路的JNK和ERK有抑制效果,对p38抑制效果不明显。三叶豆紫檀苷在浓度依赖和时间依赖上均对NFATc1蛋白的表达有抑制作用。（5）本研究发现三叶豆紫檀苷高浓度药物治疗组（20mg/kg）C57小鼠的BV/TV、Tb.N相比于去卵巢对照组小鼠有明显保护作用,Tb.Th也明显上升。结论（1）三叶豆紫檀苷抑制RANKL诱导的破骨细胞分化;（2）三叶豆紫檀苷抑制破骨细胞的骨吸收功能;（3）三叶豆紫檀苷抑制破骨细胞分化过程中特异性基因的表达;（4）三叶豆紫檀苷通过抑制MAPK和NFAT通路而抑制破骨细胞分化;（5）三叶豆紫檀苷对卵巢切除小鼠的骨质丢失有保护作用。因此,三叶豆紫檀苷具有治疗骨质疏松症的潜力。