研究背景随着质子泵抑制剂在临床的广泛应用,近年来质子泵抑制剂致急性间质性肾炎和慢性肾脏病的不良反应报道也越来越多,引起了专家的广泛关注。但关于质子泵抑制剂致肾损伤的机制却尚不明了,本文通过研究质子泵抑制剂是否会抑制肾上皮细胞（NRK-52E细胞）细胞膜上Na⁺,K⁺-ATP酶,细胞膜上Ca²⁺-ATP酶及内质网上Ca²⁺-ATP酶活性,然后造成NRK-52E细胞内Ca²⁺超载,进而损伤细胞的分子机制进行探讨。方法利用CCK-8方法检测不同浓度的PPIs给药24 h后对Hek-293及NRK-52E细胞活性的影响。采用流式细胞仪实验和激光共聚焦实验测定NRK-52E细胞内Ca²⁺浓度。Western blot实验定量NRK-52E细胞Na⁺,K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、P38 MAPK及Caspase 3蛋白相对表达量。Real Time-PCR实验测定NRK-52E细胞Na⁺,K⁺-ATP酶和Ca²⁺-ATP酶的mRNA相对表达量。使用Elisa试剂盒检测NRK-52E细胞Na⁺,K⁺-ATP酶的蛋白相对表达量。结果CCK-8结果显示随着PPIs给药浓度的增加,Hek-293及NRK-52E细胞活性降低。流式结果显示NRK-52E细胞内Ca²⁺浓度随着兰索拉唑和艾普拉唑药物浓度的增加而增加,但在给药前4 h加入10μmol/L KB-R7943后,各个加药浓度点的细胞内Ca²⁺浓度差异减小。激光共聚焦结果和流式细胞仪实验结果一致。Western blot结果显示NRK-52E细胞膜上Na⁺,K⁺-ATP酶的表达水平随着兰索拉唑和艾普拉唑浓度的增加而减小,而细胞膜上Ca²⁺-ATP酶及内质网上Ca²⁺-ATP酶活性在50和100μmol/L浓度点有下降趋势,其余浓度点不明显。Real Time-PCR结果和Western blot一致。Elisa结果表明NRK-52E细胞膜上Na⁺,K⁺-ATP酶活性随着兰索拉唑浓度的增加而减小。Western blot结果表明兰索拉唑使P38 MAPK和Caspase 3的蛋白表达量增加。结论PPIs使NRK-52E细胞内Ca²⁺浓度升高,其作用机制可能为:PPIs抑制Na⁺,K⁺-ATP酶的活性,造成胞内Na⁺浓度升高,进而通过Na⁺/Ca²⁺交换体导致胞内Ca²⁺浓度升高,然后通过激活P38 MAPK通路,诱导Caspase 3等与细胞凋亡有关的因子,进而导致肾上皮细胞损伤。而PPIs和细胞膜上及内质网上Ca²⁺-ATP酶的关系尚需要进一步的探讨。